Эндотелиальная дифференцировка мезенхимных стволовых клеток из соединительной ткани пуповины (желе Вортона) на многослойных пленках из хитозана/гиалуронинана
Хана Деннауи1, Элиана Шуэри2, Шаза Хармуш1
1 Лаборатория прикладной биотехнологии: биомолекулы, биотерапия и биопроцессы, научно-прикладной центр биотехнологии AZM, докторская школа науки и технологий, Ливанский университет, Триполи, Ливан
2 Отделение медицинской генетики, факультет медицины, университет Св. Иосифа (USJ), Мар-Микаэл, Бейрут, Ливан
Одобрено 14 Ноября 2020
Резюме
Простота заготовки мезенхимных стволовых клеток из желе Вортона (МСК-ЖВ), выраженная пластичность дифференцировки и низкая иммуногенность делают их удобным средством аллогенной клеточной терапии. Целью данного исследования было изучение способности к дифференцировке в эндотелиоподобные клетки МСК-ЖВ, культивированных на гиалуронан-хитозановых (ГХ) многослойных носителях.
Материалы и методы
В этой работе мы проводили дифференцировку МСК-ЖВ в ангиогенном направлении с применением полиэлектролитной многослойной пленки в качестве субстрата. МСК-ЖВ культивировали на ГХ-многослойной пленке и стимулировали факторами культуральной среды EGM-2®. Коллаген типа I использовали в качестве контрольного субстрата. Определяли экспрессию специфических мРНК, а именно: CD31, рецептора фактора роста сосудистого эндотелия типа 2 (VEGF2) и эндотелиального сосудистого кадхерина (VE), наряду с уровнями абсорбции Dil-ацетилированного липопротеина низкой плотности и экспрессией белкового фактора Виллебранда.
Результаты
Выделенные МСК-ЖВ имели типичную морфологию фибробластоподобных клеток. Уровни мРНК, кодирующих CD31 и KDR были выше после культивирования на ГХ-субстрате, нежели на коллагеновом покрытии, при достоверном повышении экспрессии KDR. На уровне белков, показана тенденция к повышению уровней KDR и CDH5 после инкубации на ГХ-субстрате, по сравнению с коллагеном. Кроме того, МСК-ЖВ, культивированные на ГХ, имели высокие уровни экспрессии эндотелиальных маркеров после 15 суток культивирования в среде EGM-2®.
Выводы
В данной работе мы сообщаем о новом биосовместимом субстрате, который способствует дифференцировке МСК-ЖВ в эндотелиоподобные клетки. Разработка этого субстрата является новым подходом в тканевой инженерии для создания аллогенных сосудистых трансплантатов.
Ключевые слова
Мезенхимные стволовые клетки, желе Вортона, дифференцировка, эндотелий, хитозан, гиалуроновая кислота, многослойный субстрат, тканевая инженерия.
Одобрено 14 Ноября 2020