Сравнительный анализ in vitro активности Т-клеток с CD20-специфичным химерным антигенным рецептором на основе человеческого антитела офатумумаб

Резюме

Несмотря на широкий арсенал методов борьбы с онкогематологическими заболеваниями, терапевтический инструментарий для лечения пациентов с рецидивирующими формами лейкозов и лимфом достаточно ограничен, а долговременный прогноз выживаемости негативен. Целью данного исследования было создание и изучение активности нового химерного антигенного рецептора (CAR) со специфичностью к белку CD20 и его сравнение с другими опубликованными CAR аналогичной специфичности в экспериментах in vitro.

Материалы и методы

Были получены лентивирусные конструкции, кодирующие CAR с антиген-распознающими доменами от антител 1F5, Leu16 и высокоафинного человеческого антитела – офатумумаб (2F2) с различной структурой шарнирного района (IgG vs no hinge). Затем, используя трансдукцию первичных Т-клеток здорового донора, были получены Т-клетки, экспрессирующие данные CAR.

Результаты

В качестве «золотого стандарта» был использован CAR с антигенраспознающим районом от CD19-специфичного моноклонального антитела FMC63 (Kymriah). На следующем этапе был исследован уровень специфической цитотоксичности CAR T-клеток против CD20+ клеток-мишеней линии Raji. Полученные данные свидетельствуют о высокой активности полученных CAR Т-клеток, при этом достоверных отличий между CAR различной структуры обнаружено не было. Тем не менее, такой эксперимент показывает только «моментальную» цитотоксичность, и для того, чтобы исследовать цитотоксичность CAR T-клеток в динамике, был проведен RTCA-анализ клеточной пролиферации в режиме реального времени. Необходимо отметить, что в классической постановке данный метод позволяет использовать только прикрепленные клетки-мишени, поэтому вместо клеток линии Raji были использованы клетки линии HEK 293T, эктопически экспрессирующие CD20 (HEK293-CD20). Собранные в течение суток данные RTCA свидетельствуют о том, что T-клетки, экспрессирующие бесшарнирный CAR состава 2F2-no hinge-v2, проявляют наибольшую цитотоксичность, а во время первых четырех часов разницы между CAR T-клетками не наблюдается, что соответствует данным FACS-анализа.

Выводы

Таким образом, CAR структуры 2F2-no hinge-v2 является перспективным кандидатом для проведения экспериментов in vivo, поскольку он обеспечивает выраженную CD20-специфическую цитотоксическую активность в сочетании с полностью человеческой последовательностью антиген-распознающей области.

Исследование было поддержано грантом РФФИ № 19-415-543015 р_мол_а.

Ключевые слова

Т-клетки, химерные антигенные рецепторы, терапия CAR T-клетками, офатумумаб.