ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Сравнительный анализ in vitro активности NK-клеточных линий человека, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы

Татьяна Н. Беловежец 1,2, Андрей А. Горчаков 1,2, Сергей В. Кулемзин 1, Антон Н. Чикаев 1, Ольга А. Коваль 1,3, Елена В. Кулигина 2, Александр В. Таранин 1,2
1 Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск, Россия
2 Новосибирский государственный университет, Новосибирск, Россия
3 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск, Россия

Загрузить версию в PDF

Клеточная терапия и трансплантация (КТТ)
Том 7, номер 3
Contents 

Резюме

Введение

Терапия Т-клетками, экспрессирующими химерные антигенные рецепторы (CAR), была одобрена FDA к клиническому использованию в августе 2017 года для больных с r/rALL. Несмотря на значительную эффективность, у CAR T-клеточной терапии существуют серьезные ограничения, связанные с высокой стоимостью, сложной стандартизацией и невозможностью получить CAR Т-клетки для отдельных пациентов. В связи с этим крайне привлекательным выглядит создание универсальных аллогенных CAR T-клеток, однако на существующем уровне развития инструментов геномного редактирования и селекции субпопуляций Т-клеток этот подход сопровождается риском развития реакции «трансплантат против хозяина». Возможным решением этих проблем может быть переход к иммортализованным NK-клеточным линиям в качестве носителей CAR. Подобные линии недорогие в наработке, могут быть стандартизованы и не вызывают реакцию «трансплантат против хозяина». К настоящему моменту описано несколько NK-клеточных линий человека, однако систематического сравнения их свойств в качестве носителей CAR проведено не было.

Методы

В данное исследование были включены три NK-клеточные иммортализованные линии человека (А, В и NK-92). На основе каждой из трех линий методом лентивирусной трансдукции были получены сублинии, стабильно экспрессирующие CAR, специфичный к белку человека CD20. После этого был измерен уровень цитотоксичности CAR-NK клеточных линий по отношению к CD20-положительным клеткам линии Raji (клетки лимфомы Бёркитта) и клеткам линии HEK293Т, эктопически экспрессирующим CD20, либо изогенным контрольным клеткам.

Результаты

Все три полученные CAR-NK-клеточные линии обнаруживали значимый уровень цитотоксичности против клеток линии Raji, однако клетки NK-92 дикого типа также лизировали мишени Raji. В связи с этим, для более корректного сравнения уровней цитотоксичности CAR-NK-клеточных линий в тестах in vitro были получены клетки линии HEK293Т, экспрессирующие CD20. Уровень неспецифической цитотоксичности немодифицированных NK клеток против таких мишеней не превышал 20% в диапазоне эффектор: мишень=1-5, при этом уровень специфической, CAR-опосредованной цитотоксичности составлял 73% (CAR-NK-92), 55% (CAR-B) и 34% (CAR-A) при соотношении эффектор:-мишень=5.

Заключение

Все полученные CAR-NK-клеточные линии проявляют значимый уровень цитотоксичности по отношению к CD20-позитивным клеткам-мишеням в тестах in vitro, и клетки линии NK-92 проявляют самый высокий уровень как специфической, так и неспецифической цитотоксичности. Необходимы дополнительные исследования in vivo, чтобы определить профили безопасности и эффективности CAR-NK эффекторов.

Благодарности

Работа выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки РФ, соглашение № 14.604.21.0169 (уникальный идентификатор проекта RFMEFI60417X0169).

Ключевые слова

Химерный антигенный рецептор, NK-клеточные линии, цитотоксичность.


Возврат к списку