AL-08. Гетерогенность транслокации t(10;11) с молекулярным продуктом KMT2A-MLLT10 у пациентов с острым миелоидным лейкозом

Резюме

Определение транслокаций гена KMT2A (MLL) в диагностике острого миелоидного лейкоза является обязательной процедурой по причине высокой частоты встречаемости данных аберраций, а также их влияния на стратификацию пациентов по группам риска. Одной из лидирующих перестроек после t(9;11) является t(10;11). Распространенность ее по разным оценкам может доходить до 8-9% в структуре острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) (D.Steinhilber et al., 2018; T. Ksiazek et al., 2020). Основным молекулярным продуктом t(10;11) является KMT2A-MLLT10 (MLL-AF10), хотя описаны и другие гены. Особенность химерного транскрипта KMT2A-MLLT10 заключается в многообразии механизмов, приводящих к его формированию (Klaus et al., 2003). Диагностика данной транслокации затруднена тем, что могут формироваться криптические транслокации, не детектируемые цитогенетическими или молекулярно-генетическими методами. В данном исследовании представлены четыре случая t(10;11)(p12;q23) с молекулярным продуктом KMT2A-MLLT10 у детей с ОМЛ, но с разным механизмом его образования, включая один случай криптической транслокации.

Материалы и методы

В исследование включены 4 пациента с (ОМЛ) М5, медиана возраста которых составила 11,3 месяца. Материалом для исследования послужила РНК, выделенная из мононуклеаров костного мозга (КМ) пациентов с ОМЛ. Химерные транскрипты гена KMT2A (AF4, AF6, AF9, MLLT10, ENL, ELL) определяли методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) с последующей верификацией методом прямого секвенирования по Сэнгеру (A. Andersson et al., 2001). Кариотипирование опухолевых клеток выполнялось методом дифференциального G-окрашивания 24-часовой культуры клеток КМ (RPMI-1640 с добавлением 15% эмбриональной телячьей сыворотки, 1% L-глутамина, 1% антибиотика-антимикотика). FISH проводили на интерфазных ядрах и метафазных пластинках с использованием локус-специфического двухцветного ДНК-зонда для гена KMT2A (11q23) (LSI Dual-Color, Break Apart Rearrangement Probe, Vysis, США) в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя. Анализ и регистрация данных осуществлялись в соответствии с рекомендациями Международной цитогенетической номенклатуры (International System for Human Cytogenic Nomenclature, ISCN).

Результаты

В период с 2010 по 2021 год в РНПЦ ДОГ было диагностировано 103 пациента с первичным ОМЛ. У 14,6% выявлены перестройки гена KMT2A. KMT2A-MLLT10 в структуре KMT2A-положительных пациентов занимает 26,6% и 3,8% среди всех обследованных пациентов с ОМЛ. У пациента №1 (мальчик, 4 мес.) цитогенетически обнаружена комплексная перестройка с визуализацией маркерной хромосомы, образованной от слияния хромосом 10, 11 и 17 с вовлечением KMT2A гена. Не смотря на сложность образования, на молекулярном уровне детектирован классический фьюжн-белок, который по результатам секвенирования продемонстрировал слияние 10 экзона гена KMT2A и 9 экзона гена MLLT10. У пациента №2 (девочка; 13,2 месяца) выявлен клон лейкемических клеток с транслокацией t(10;11) и инверсией inv(11)(q21q23)/KMT2A(+) c образованием химерного гена KMT2A-MLLT10. Данный вид перестройки является наиболее классическим. У пациента №3 (девочка, 16 лет) при проведении стандартного кариотипирования выявлен сложный кариотип с наличием несбалансированного варианта транслокации t(10;11), при котором выявлен дериват только 10 хромосомы (der(10)t(10;11)(p12;q23q21)amp(5`KMT2A). Методом ОТ-ПЦР выявлен молекулярный продукт KMT2A-MLLT10 с участием 8 экзона гена KMT2A и 9 экзона гена MLLT10. У пациента № 4 (девочка, 9 месяцев) цитогенетический анализ не выявил хромосомных перестроек, ассоциированных с острым лейкозом. При этом обнаружен химерный транскрипт KMT2A-MLLT10 методом ОТ-ПЦР. Таким образом, несмотря на различия на хромосомном уровне на уровне генов, у всех пациентов образуются практически идентичные молекулярные продукты.

Заключение

Тщательная идентификация перестроек с участием гена KMT2A чрезвычайно важна для прогнозирования заболевания и может быть обеспечена только с помощью комбинации стандартного кариотипирования (G-окрашивание) и молекулярно-цитогенетических (FISH и ПЦР) методов диагностики.

Ключевые слова

Острый миелоидный лейкоз, диагностика, KMT2A-MLLT10.