GC-04. Создание in vivo модели терапии рака простаты для исследования противоопухолевого потенциала онколитических вирусов в сочетании с CAR T-клеточной иммунотерапией

Резюме

Несмотря на то, что рак простаты неплохо поддается хирургической и гормональной терапии на ранних стадиях, данное заболевание крайне опасно из-за склон- ности к метастазированию и развитию хеморезистетных форм. В связи с этим разработка и тестирование высокоэффективных средств терапии рака простаты являются актуальными задачами. Нами был предложен вариант комбинированной терапии, объединяющий два перспективных подхода к лечению опухолей: CAR-T-клеточную терапию и виротерапию онколитическими вирусами. Первым компонентом выступают T-лимфоциты, «вооруженные» химерным антигенным рецептором со специфичностью к основному антигену рака простаты PSMA (aPSMA-CAR-T). Совместно с aPSMA-CAR-T предлагается использовать рекомбинантный вирус осповакцины штамма Л-ИВП, в геном которого интегрированы гены секретируемых цитокинов GM-CSF и CXCL11 (VV-GMCSF-CXCL11). В дополнение к собственной онколитической активности вируса, данная комбинация трансгенов должна привлекать в очаг опухоли как клетки иммунной системы, так и экзогенно вводимые CAR-Т. Данная работа посвящена созданию in vivo модели для оценки противоопухолевого потенциала исследуемых aPSMA-CAR-T и VV-GMCSF-CXCL11 как в комбинации, так и в формате монотерапии.

Материалы и методы

Нами были получены ксенографты клеток аденокарциномы простаты человека РС3, экспрессирующих PSMA (PC3-PSMA), на мышах линии NOD/Scid. PC3-PSMA вводились животным подкожно в количестве 2*10^6 клеток/мышь. Первая группа животных получала монотерапию VV-GMSCF-CXCL11 на 16-е сутки в виде внутриопухолевых инъекций (10^7 БОЕ/мышь). Мышам из второй группы внутривенно вводили aPSMA-CAR Т-лимфоциты человека (2*10^6 клеток/мышь) на 18-е и 23-и сутки. Третья группа получала оба компонента терапии: однократную внутриопухолевую инъекцию VV-GMSCF-CXCL11 и два системных введения aPSMA-CAR-T в аналогичных концентрациях с теми же временными интервалами. Контрольным группам интратуморально вводили физраствор и внутривенно нетрансдуцированные Т-клетки.

Результаты

Было показано, что однократное введение вируса ингибирует рост опухоли на 90% на 15-е сутки после начала лечения. При этом инъекции PSMA-специфичных CAR-Т клеток человека не имели терапевтического успеха в этой модели ни моноформате, ни в комбинации с виротерапией. Причиной стал недостаточный уровень иммуносупрессии линии NOD/Scid: CAR-T-клетки элиминировались из организма мышей уже на 7-е сутки вследствие реакции «хозяин против трансплантата». Поэтому эксперимент был повторен на более иммунокомпрометированной мышиной линии NSG. Было показано, что в NSG мышах CAR-T способны к персистенции и пролиферации, и, в отличие от модели NOD/Scid, в данном случае наиболее эффективной оказалась монотерапия именно CAR-T-клетками. При монотерапии вирусом, как и при комбинированной терапии, эффективность существенно снижалась. Вероятно, это связано с генерализацией вирусной инфекции на фоне тяжелого иммунодефицита у NSG мышей (количественный ПЦР анализ показал наличие большого числа вирусных частиц в крови животных). Оптимизировать модель можно посредством корректировки дозы вируса, чтобы избежать его негативного воздействия на организм мышей.

Выводы

В целом следует признать, что оба предложенных варианта имеют существенные ограничения и не являются оптимальными трансляционными моделями комбинированной терапии рака простаты. По-видимому, целесообразно использовать иммунокомпетентную мышиную модель с сингенно трансплантированными PSMA+ опухолями, а в качестве терапии – CAR T-клетки мышей.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ мк18-29-09044.

Ключевые слова

Онколитический вирус, CAR-Т, рак простаты, PSMA.