GC-02. Доклинические исследования СD20-специфического Car-T клеточного препарата
Татьяна Н. Беловежец, Андрей А. Горчаков, Сергей В. Кулемзин
Институт молекулярной и клеточной биологии СО РАН, Новосибирск, Россия
Резюме
Выраженная клиническая активность CD19-специфичной CAR T-клеточной терапии обеспечила активные исследования в области адоптивной клеточной иммунотерапиии онкологических заболеваний человека и привела к одобрению FDA 5 препаратов. Вместе с тем становится понятно, что необходимо дальнейшее улучшение данного подхода, а именно, обеспечение хоминга и долговременной персистенции, расширение спектра мишеней, снижение стоимости, переход к аллогенному формату. В настоящей работе было проведено сравнение in vitro и in vivo трех различных CD20-специфичных CAR T-клеток с референсным CD19-специфическим CAR на основе антитела FMC63 (Kymriah), первым допущенным к клинической практике.
Материалы и методы
Были получены лентивирусные конструкции, кодирующие CAR с антиген-распознающими доменами от мышиных антител 1F5, Leu16 и человеческого антитела – офатумумаб (2F2). Полученные конструкции отличались только антигенраспознающим доменом. Затем были получены CAR T-клетки из периферических Т-клеток здорового донора и проверена их активность.
Результаты
В первую очередь был оценен уровень экспрессии всех полученных CAR на поверхности клеток при помощи проточной цитометрии. Полученные CAR T-клетки проявляли одинаковую цитотоксичность в 4-х часовом тесте против клеток-мишеней линии Nalm6, эктопически экспрессирующих CD20 (рис. 1). Скорость пролиферации CAR T-клеток с антигенраспознающими районами от 1F5 и FMC63 была примерно в 1,5 раза выше всех остальных CAR T-клеток. В тесте на повторяющуюся цитотоксичность CAR T-клетки на основе 1F5 и Leu16 показали более перспективные результаты (рис. 2). Все полученные CAR T-клетки контролировали ксенотрансплантированую опухоль в мышах линии NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ достоверно лучше, чем нерелевантные CAR T-клетки (специфичные к PSMA) (рис. 3).
Выводы
Таким образом, все полученные CAR Т-клетки проявляют выраженную активность в модельных экспериментах in vitro и in vivo. Основываясь на полученных данных, можно сделать прогноз о перспективности применения таких CAR T-клеток в клинике в моно- или биспецифичном формате.
Исследование было поддержано грантом РФФИ №19-415-543015 р_мол_а.
Ключевые слова
Т-клетки, химерные антигенные рецепторы, терапия CAR T-клетками, офатумумаб.