ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Оценка свойств стромальных клеток костного мозга в аспекте их роли в восстановлении гемопоэза

Николай Ю. Цветков, Ильдар М. Бархатов, Алена И. Шакирова, Дмитрий С. Романюк, Олеся Г. Смыкова, Вера В. Тепляшина, Алексей Б. Чухловин, Людмила С. Зубаровская, Борис В. Афанасьев

НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт- Петербург, Россия

Резюме

Введение

Роль стромального микроокружения в трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) заключается в не линие-специфическом воздействии на пролиферацию и дифференцировку ГСК. Hаблюдаемая в ряде случаев гипофункция трансплантата обуславливает необходимость разработки функциональных тестов исследования клеток стромы с целью обоснования показаний к совместной трансплантации гемопоэтических и стромальных клеток (СК) и, возможно, внедрения иных терапевтических подходов. Целью данного исследования является изучение роли стромальных клеток костного мозга в процессе приживления донорского костного мозга и их значения в развитии посттрансплантационных осложнений.

Материалы и методы

В исследовании проводился анализ течения посттрансплантационного периода у 10 пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) и 7 здоровых доноров. За 2 недели до проведения ТКМ после проведении миелоэксфузии проводилась селекция ядросодержащих клеток с последующей эксплантацией на культуральную поверхность с культуральной средой aMEM, содержащей 20% сыворотки. При формировании колоний фибробласт-подобных клеток (КОЕ-Ф) проводился анализ их гемостимулирующей активности (в культуральной системе «агаровая капля-жидкая среда»), способности к дифференцировке (адипогенной и остеогенной), проводился анализ относительной экспрессии генов SELECTIN и CXCR4. Результаты. При сравнении функциональных характеристик СК здоровых доноров и пациентов было отмечено у последних увеличение гемостимулирующей активности, выражающейся в увеличении больших и малых КОЕ-ГМ (p<0,02). Помимо этого, было отмечено увеличение способности к ортодоксальной дифференцировке у пациентов с ОМЛ (p=0.03), причем количество КОЕ-Ф, способных к адипогенной дифференцировке находилось в обратной корреляционной зависимости к срокам восстановления тромбоцитов (p=0,05). Напротив, на фоне увеличения колоний, способных к остеогенной дифференцировке отмечается увеличение сроков приживления клеток лейкоцитарного пулла (p=0,05). Помимо этого, было отмечена прямая корреляционная зависимость между КОЕ-Ф, способных к остеогенной дифференцировке и количеством бластных клеток на момент трансплантации (p=0,05). При анализе экспрессии ряда генов в популяции стромальных клеток, ассоциированных с их функциональными характеристиками было выявлено снижение экспрессии гена CXCR4, обуславливающего хоуминг-эффект, в зависимости от возраста пациента (p=0,05). Также было выявлено, что в группе пациентов в популяции СК отмечается существенно более высокая экспрессия гена SELECTIN по сравнению с группой здоровых доноров.

Заключение

СККМ пациентов перед ТКМ в сравнении с группой здоровых доноров характеризуются более высокой пролиферативной активностью и экспрессией молекул, опосредующих хоуминг ГСК, что можно объяснить реакцией стромы на предшествующие курсы химиотерапии и миелосупрессию. СККМ пациентов перед ТКМ в сравнении с группой здоровых доноров характеризуются более выраженной способностью к остеогенной и адипогенной дифференцировке. При этом увеличение активности адипогенной дифференцировки ассоциировано с укорочением сроков восстановления кроветворения, а остеогенной – с большим процентом бластов в костном мозге, что может препятствовать приживлению трансплантата и продлевать процесс реконституции гемопоэза.

Ключевые слова

трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, мезенхимные стволовые клетки, острый миелоидный лейкоз, гемостимулирующая активность, приживление


Том 5, Номер 1
01.03.2016

Загрузить версию в PDF

Возврат к списку