ISSN 1866-8836
Клеточная терапия и трансплантация

Изменить отображение страницы на: только анонсы
Том 1, Номер 2
01.12.2008
Том 1, Номер 2
Главный редактор
Афанасьев Б. В. (Санкт-Петербург, Россия)
Со-редакторы
Вагемакер Г. (Роттердам, Нидерланды)
Цандер А. Р. (Гамбург, Германия)
Заместитель главного редактора
Чухловин А. Б. (Санкт-Петербург, Россия)
Фезе Б. (Гамбург, Германия)
Новик А. А. (Москва, Россия)
Ответственный редактор
Клаудиа Кольтценбург (Гамбург, Германия)
Редакционная коллегия
Алейникова О. В. (Минск, Беларусь)
Алянский А. Л. (Санкт-Петербург, Россия)
Анагносту А. (Бостон, США)
Андреефф М. (Хьюстон, США)
Бaйков В. (Санкт-Петербург, Россия)
Баранов В. С. (Санкт-Петербург, Россия)
Бархатов И. М. (Санкт-Петербург, Россия)
Баум К. (Ганновер, Германия)
Бахер У. (Гамбург, Германия)
Билько Н. М. (Киев, Украина)
Борсет М. (Трондхейм, Норвегия)
Быков В. Л. (Санкт-Петербург, Россия)
Бюхнер Т. (Мюнстер, Германия)
Вестенфельдер К. (Солт-Лейк-Сити, США)
Вилесов А. Д. (Санкт-Петербург, Россия)
Вислофф Ф. (Осло, Норвегия)
Дини Дж. (Генуя, Италия)
Дризе Н. (Москва, Россия)
Галибин О. В. (Санкт-Петербург, Россия)
Ганзер А. (Ганновер, Германия)
Гранов Д. А. (Санкт-Петербург, Россия)
Звартау Э. Э. (Санкт-Петербург, Россия)
Зверев О. Г. (Санкт-Петербург, Россия)
Зубаровская Л. С.(Санкт-Петербург, Россия)
Иванов Р. А. (Москва, Россия)
Климко Н. Н. (Санкт-Петербург, Россия)
Коза В. (Пльзень, Чехия)
Кольб Х. (Мюнхен, Германия)
Коноплева М. (Хьюстон, США)
Крегер Н. (Гамбург, Германия)
Маликов А. Я. (Санкт-Петербург, Россия)
Менткевич Г. Л. (Москва, Россия)
Михайлова Н. Б. (Санкт-Петербург, Россия)
Наглер А. (Тель Хашомер, Израиль)
Неворотин А. И. (Санкт-Петербург, Россия)
Немков А. С. (Санкт-Петербург, Россия)
Нет Р. (Гамбург, Германия)
Остертаг В. (Гамбург, Германия)
Палутке М. (Детройт, США)
Румянцев А. Г. (Москва, Россия)
Савченко В. Г. (Москва, Россия)
Смирнов А. В. (Санкт-Петербург, Россия)
Тец В. В. (Санкт-Петербург, Россия)
То Б. (Аделаида, Австралия)
Тотолян А. А. (Санкт-Петербург, Россия)
Усс А. Л. (Минск, Беларусь)
Феррара Дж. (Энн Арбор, США)
Фиббе В. (Лейден, Нидерланды)
Штамм К. (Берлин, Германия)
Эвераус Х. (Тарту, Эстония)
Эгеланд Т. (Осло, Норвегия)
Эльстнер Е. (Берлин, Германия)
Эмануэль В. Л. (Санкт-Петербург, Россия)
Обзор выпуска

Продвигаясь вперед

Всего лишь несколько месяцев минуло с выхода пилотного выпуска журнала «Клеточная терапия и трансплантация» (КТТ), и наградой за это стал опыт взаимного общения с авторами, рецензентами и читателями.

В отличие от текущих статей и обзоров по ряду интересных тем, этот выпуск содержит специальный раздел «Терапия мезенхимными клетками» (7 статей из 15).

В том же разделе, в дополнение к статьям про МСК, Мариуш Ратайчак и соавт. сообщает о небольших стволовых клетках эмбрионального типа (НСКЭТ) и их потенциале при регенерации тканей.

Из смежных областей мы публикуем специальную лекцию Тима Ханта «Вхождение и выход из митоза», которую он читал на симпозиуме в Вильзеде в 2008 г. Она публикуется совместно с нашим порталом-партнером www.wilsede-science-connections.com, ресурсы которого в мультимедийной сфере мы начинаем делать доступными для более широкой аудитории.

Мы особенно хотим стимулировать молодых исследователей-медиков к тому, чтобы их первые работы прошли независимое рецензирование и были опубликованы в КТТ. Начиная с этого выпуска, страница «Содержание» будет содержать обозначение
«1-аяМП», обозначающее авторов, для которых данная статья в КТТ является первой статьей в международном журнале.

Мы хотели бы поблагодарить нижеследующих коллег за проведение независимого рецензирования данного выпуска КТТ: Ульрику Бахер, Алексея Б. Чухловина, Бориса Фезе, Николая Н. Климко, Николауса Крегера, Клаудию Ланге, Катарину Лебланк, Николая Н. Мамаева, Людмилу С. Зубаровскую.

Борис Владимирович Афанасьев, Аксель Рольф Цандер


От управляющего редактора

Поскольку КТТ является журналом открытого доступа, то как читатели, так и авторы могут получить весьма большие выгоды. В чем же выиграют авторы? Из списков наших публикаций в Сети вы можете непосредственно выйти на Вашу статью в журнале КТТ. Наш читатель может нажать мышкой на эту ссылку, и статья немедленно будет доступной, причем бесплатно. Это означает, что любой читатель в Сети имеет доступ к Вашей статье и без дополнительных усилий может цитировать Вашу статью из журнала КТТ в своей собственной работе.

Статьи журнала КТТ уже содержатся в перечнях CAS и DOAJ, с дальнейшим ростом их известности в перспективе. 

Я очень рада тому, что я веду этот журнал с точки зрения менеджерской и производственной работы, совместно с нашим издательским офисом, расположенным как в Гамбурге, так и в Санкт-Петербурге. Наша производственная команда также является зоной дискуссии для различных образов мышления и это – исключительный опыт создания научного журнала совместно, как в отношении управления, так и в плане технологии.

Я хотела бы поблагодарить нижеперечисленных коллег за помощь нам в столь удачном старте: bitfarmers.com (в том числе Михаэля Хирдеса, Джину Штайнер и Михаэля Зендке), а также Рене Хорнунга, Людмилу Лашковскую, Викторию Левенко, Яну Оникийчук, Мелиссу Притчард, Ютту Реберс, Анну Старикову и Оксану Жебель.

Если Вы, как авторы и/или читатели, желаете задать какие-либо вопросы, предложения или комментарии, то они в высшей степени приветствуются. Прошу Вас контактировать со мной напрямую, благодарю Вас.

Клаудия Кольтценбург
managingeditor@spam is badctt-journal.com

Программные статьи

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Состав и функциональные особенности монослойной культуры пуповинной крови человека

Бархатов И. М., Румянцев С. А., Владимирская Е. Б., Афанасьев Б. В.

Предварительные данные клинического использования мезенхимных стволовых клеток для профилактики и лечения РТПХ у пациентов после аллогенной ТГСК

Станкевич Ю. А., Головачева А. А., Бабенко Е. В., Алянский А. Л., Паина О. В., Зубаровская Л. С., Семенова E. В., Полынцев Д. Г., Кругляков П. В., Афанасьев Б. В.

Трансплантация кроветворных стволовых клеток при рассеянном склерозе

Ю. Л. Шевченко, А. А. Новик, А. Н. Кузнецов, Б. В. Афанасьев, И. А. Лисуков, O. А. Рукавицын, А. А. Мясников,
В. Я. Мельниченко, Д. А. Федоренко, T. И. Ионова, Р. А. Иванов, Г. Городокин

Обзорные статьи о терапии мезенхимными клетками

Иерархия мезенхимных стволовых клеток

Шипунова (Нифонтова) И. Н., Свинарева Д. А., Чертков И. Л., Дризе Н. И.

Лизат тромбоцитов для ускоренного размножения мезенхимных стромальных клеток человека

Ланге К., Чакироглу Ф., Шписс А., Каппалло-Оберманн Х., Цандер А. Р.

Статьи

Каспофунгин в качестве вторичной профилактики или терапии у больных при аллогенной трансплантации стволовых клеток с предыдущей историей или риском системных или инвазивных инфекций

Штуте Н., Забелина Т., Фезе Б., Хассенпфлюг В., Панзе Й., Вольшке К., Айюк Ф., Шидер Х., Ренгес Х., Кратохвилл А.,
фон Хинюбер Р., Эрттманн Р., Цандер А.Р., Крегер Н.

Влияние длительного введения Г-КСФ на клональный состав кроветворной ткани у химер

Шипунова (Нифонтова) И. Н., Сац Н. В., Свинарева Д. А., Петрова Т. В., Дризе Н. И., Савченко В. Г.

Обзорные статьи

Программные статьи

Вхождение в митоз и выход из него (Видеолекция)

Загрузить версию в PDF

Тим Хант

Клетки входят в митоз (в более общем виде – в М-фазу цикла), когда активируются комплексы CDK1/циклин. Фосфорилирование при посредстве этих и других митотических протеинкиназ отвечает за реорганизацию клетки и запуск перехода в метафазу.
Наша работа проводилась в основном на ооцитах и яйцеклетках лягушек и клеточных экстрактах. Нашей целью было выяснить, сколько белков должно быть фосфорилировано, чтобы достичь этого состояния и пытались оценить число митотических «мишеней» для различных сочетаний циклина и CDK на определенный момент.
Выход из митоза, начинающийся с перехода от метафазы к анафазе, происходит тогда, когда активируется фактор, способствующий анафазе (АРС/С), который метит полиубикитиновыми цепями небольшое число целевых белков, включая циклины и секурин, что обозначает их как мишени для протеолиза в протеасомах. При этом хроматиды разделяются и движутся к противоположным полюсам клетки, где они деконденсируются и снова формируют функционально активное клеточное ядро. При цитокинезе идет разделение на две дочерние клетки. Митотические фосфопротеины возвращаются к своему интерфазному (гипо- или нефосфорилированному) состоянию.
Недавно мы случайно открыли, что фактор, ответственный за это дефосфорилирование после митоза, совершенно неактивен в экстрактах из клеток М-фазы (состояние митоза), и реактивируется при выходе клеток из митоза. Это объясняет, каким образом белки могут почти полностью переходить в гиперфосфорилированное состояние: здесь не только активируются киназы, но и отключаются фосфатазы, противодействующие этому. Представлены доказательства, которые привели нас к такому заключению. Они получены при исследованиях экстрактов яйцеклеток лягушки, выведенных из цитостатического блока путем добавления CaCl2, а также того факта, что кальцинейрин (протеинфосфатаза 2В) играет роль в уходе от сцепления с CSF. Однако реальная работа по восстановлению белков в их интерфазном гиперфосфорилированном состоянии осуществляется фактором, который мы назвали фосфатазой Х. Принадлежность и регуляция этого фактора подлежит дальнейшему обсуждению.

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Первичный отчет о фазе I клинических испытаний: профилактика и лечение острого послеоперационного повреждения почек аллогенными мезенхимными стволовыми клетками у кардиохирургических больных при операциях на открытом сердце

Загрузить версию в PDF

Гуч А., Доти Дж., Флорес Дж., Свенсон Л., Тегель Ф., Райсс Р. Г., Ланге К., Цандер А. Р., Ху Дж., Пул С., Жанг П., Вестенвельдер К.

Наши обширные данные доклинического исследования, показывают, что острое повреждение почек (ОПП), индуцированное ишемией/реперфузией – резистентное к лечению осложнение у больных - может эффективно лечиться путем назначения аллогенных мезенхимных стволовых клеток (МСК). На этом основании в настоящее время проводится одобренная FDA I фаза клинических испытаний (www.clinicaltrials.gov; NCT00733876) больных, которые имели высокий риск развития тяжелой ОПП после хирургии на открытом сердце. В рамках испытаний безопасности метода, инфузии аллогенных МСК проводили больным после завершения хирургического вмешательства при аорто-коронарном шунтировании или хирургии клапанов сердца. В исследовании участвовали лица старше 65 лет с наличием почечных заболеваний, сахарного диабета, артериальной гипертензии, коронарной болезни сердца, тяжелой сердечной недостаточности и/или хронической обструктивной болезни легких. Введение МСК проводили по возрастающей, причем первым пяти больным проводилась инфузия клеток в определенной низкой дозе на кг массы тела через бедренный катетер, помещенный в надпочечную часть аорты. Данное сообщение содержит обобщенные сведения о клиническом течении у этих пяти больных, которых лечили по этому протоколу. Почечная функция не нарушалась после операции ни у одного из больных, и на текущий момент не выявлено побочных эффектов или тяжелых негативных явлений. Однако один из больных внезапно скончался через 26 суток после выписки по причинам, которые были расценены главным исследователем и членами Совета по мониторингу данных и безопасности, как не относящиеся к препарату и способу его применения. Следующая группа из пяти больных получит MСК в средней дозе на кг массы тела, и, если при этой дозе не возникнут проблемы с безопасностью, то еще пять больных будут пролечены при высокой дозе МСК на кг массы тела. Предварительная эффективность терапии МСК для профилактики и лечения послеоперационного ОПП в этом контингенте высокого риска (кардиохирургических больных) будет определяться по сравнению исходов у испытуемых лиц (частоты, тяжести и длительности послеоперационного ОПП, временной или постоянной зависимости от диализа, длительности госпитализации или гибели до 30 сут.), и в большой группе больных исторического контроля (база данных на www.STS.org).

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Уникальная популяция мобильных небольших эмбрионоподобных стволовых клеток (МСКЭ) сохраняется в тканях взрослого организма: физиологические и патологические последствия

Загрузить версию в PDF

Ратайчак М.З., Кучал М., Шин Д.М., Руи Л., Друкала Ю., Марлиш В., Ратайчак Я., Зуба-Сурма Э.К.

Накапливаются сведения о том, что ткани взрослого организма содержат популяцию весьма примитивных плюрипотентных стволовых клеток (СК). В недавних исследованиях наша группа провела идентификацию небольших по размеру стволовых клеток в костном мозге мыши и других органах взрослыго организма. Эти клетки экспрессируют маркеры, характерные для стволовых клеток, происходящих эпибласта/зародышевых клеток. Мы назвали эти клетки «очень маленькими стволовыми клетками, схожими с эмбриональным» (МСКЭ). Мы предположили, что эти клетки, которые накапливаются в период ранней гаструляции в развивающихся тканях/органах, играют важную роль в обороте тканеспецифических/коммитированных популяций СК. На основании этого, мы допускаем, что зародышевая линия клеток является не только источником, но и «основой или костяком» для фракции стволовых клеток во взрослом организме. Мы показали, что МСКЭ могут быть мобилизованы в периферическую кровь, и число этих циркулирующих клеток повышается в период стресса и повреждений тканей/органов (например, при инфаркте миокарда, инсульте). Кроме того, наши данные указывают на то, что МСКЭ защищены от неконтролируемой пролиферации и образования тератом вследствие уникального типа метилирования отдельных генов, который реализуется по механизму соматического геномного импринтинга. Наконец, мы предполагаем, что МСКЭ в патологических ситуациях могут быть вовлечены в развитие некоторых злокачественных заболеваний (например, таратом, герминальных опухолей, сарком в детском возрасте).

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Состав и функциональные особенности монослойной культуры пуповинной крови человека

Загрузить версию в PDF

Бархатов И. М., Румянцев С. А., Владимирская Е. Б., Афанасьев Б. В.

Резюме

Введение

В условиях монослойной культуры клетки пуповинной крови способны прикрепляться к пластику и по своей морфологии напоминают культивируемые в сходных условиях мезенхимальные стволовые клетки (МСК) костного мозга. Однако присутствие в прилипающей фракции пуповинной крови МСК до сих пор не является очевидным. Данное исследование выполнено с целью определения состава и ряда функциональных свойств МСК-подобных клеток в монослойной культуре пуповинной крови (МКПК) человека.

Материалы и методы

Исследовали сорок три образца пуповинной крови, полученые в срочных родах на фоне неосложненной беременности у рожениц при атравматичном заборе. Исследования проводили после  19-31 часов хранения образца. Ядросодержащие клетки выделяли на градиенте плотности фиколла (1,077 г/мл), затем помещали в полную культуральную среду, содержащую среду DMEM LG, эмбриональную телячью сыворотку - 30%, пенициллин  (100 Ед/мл), стрептомицин (0,1 мг/мл). Анализ фенотипа монослойной культуры ПК и ее мононуклеарной фракции проводили на проточном цитофлюориметре FACScan. Были использованы следующие конъюгированные флюорохромами антитела: CD34 PE; CD34 FITC, CD45 FITC; CD45 PE; CD14 FITC; CD31 PE; CD31 FITC; CD61 FITC; CD3 FITC; CD19 PE; CD117 PE; HLA ABC FITC; HLA DR.  С целью определения гемостимулирующих свойств монослойной культуры ПК проводили клонирование гранулоцитарно-макрофагальных предшественников (КОЕ-ГМ) в культуральной системе «агаровая капля-жидкая среда». В качестве источника колониестимулирующей активности ПК использовали МКПК. Клетками-мишенями были КОЕ-ГМ мононуклеарной фракции ПК, дающие клональный рост в агаровой культуре. Для индукции дифференцировки МСК-подобных клеток ПК в адипогенном и остеогенном направлении клетки помещали в полную среду с добавлением  дексаметазона (1х10-7 М); инсулина (1х10-9 М) или β-глицерофосфата (7х10-3 М); дексаметазона (1х10-8 М); аскорбиновой кислоты (2х10-4 М) соответственно. Оценка экспрессии генов (CDH11,VCAM1, ITGB1, IL6ST, TFRC, ALCAM, MPL, TPO, ENG, NT5E, IL6R, BGLAP, COL1A2, AFP, LPL, ACTA1, TNNI3, TPM1)  проводилось методом RT-PCR (амплификация продуктов обратной транскрипции).

Результаты

В большинстве случаев культура клеток, прилипших к пластику была гетерогенна: наблюдали узкие веретенообразные клетки и большие полигональные. В ряде образцов обнаруживали небольшие колонии (до 100 клеток). В 3 из 43 исследованных образцов ПК наблюдали крупные колонии, численностью более 1000 плотноупакованных, имеющих типичную для фибробластов веретенообразную форму клеток. При анализе преобладающих клеточных типов было выявлено, что большую часть прикрепленных к пластику клеток составляли гемопоэтические клетки (медиана 60,17%). Около трети от всей СD45-положительной популяции составляли СD14-положительные клетки. Остальные негемопоэтические клетки представляли собой фенотипически гетерогенную популяцию. На фоне длительного культивирования и последовательного пассирования фенотип культуры меняется – отмечается элиминация из культуры гемопоэтических клеток и увеличение доли МСК и ЭКП. При инициации культуры значительно изменяется соотношение ГСК- и ЭКП-подобных клеток среди CD34-положительной популяции в пользу ЭКП. МСК-подобные клетки МКПК способны к дифференцировке в адипоциты и остеобласты, что подтверждается специфической окраской и свидетельствует в пользу их функциональной состоятельности. В ряде культур индукция дифференцировки инициировала открепление большей части клеток. Прилипающая фракция первичной монослойной культуры оказывает стимулирующее влияние на колониеобразование КОЕ-ГМ, по характеру и силе воздействия близкое стандартному лейкоцитарному фидеру. Преимущественное влияние на их пролиферативную активность оказывают клеточные элементы с маркерами МСК (CD90+CD31-). Удлинение временных параметров получения и хранения образцов ПК приводят к снижению гемостимулирующей активности. При сравнении экспрессии ряда генов выявлено, что профиль экспрессии МСК костного мозга и клеток МКПК идентичен за исключением тромбопоэтина, экспрессия гена которого не отмечалась в МКПК.

Заключение

Пуповинная кровь содержит субпопуляции клеток негемопоэтического происхождения,  фенотипически и функционально сходных с МСК костного мозга. Однако их низкая концентрация, а также сниженная репопулирующая активность в стандартных культуральных условиях, ставят под сомнение возможное использование ПК в качестве альтернативного источника МСК.

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Предварительные данные клинического использования мезенхимных стволовых клеток для профилактики и лечения РТПХ у пациентов после аллогенной ТГСК

Загрузить версию в PDF

Станкевич Ю. А., Головачева А. А., Бабенко Е. В., Алянский А. Л., Паина О. В., Зубаровская Л. С., Семенова E. В., Полынцев Д. Г., Кругляков П. В., Афанасьев Б. В.

Резюме

Введение

Костный мозг человека содержит гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) и негемопоэтические стволовые клетки, называемые мезенхимными стволовыми клетками (МСК). Эти клетки улучшают приживление ГСК после аллогенной ТГСК и способствуют репарации тканей мезенхимного происхождения, а также способны модулировать иммунный ответ in vitro и in vivo. В результате, ко-трансплантация аллогенных МСК с аллогенными ГСК гипотетически обладает такими положительными эффектами, как улучшение приживления трансплантата и восстановление баланса внутри иммунной системы. Это обстоятельство может быть использовано как для профилактики РТПХ, так и для лечения острой стероид-резистентной РТПХ или хронической РТПХ. В данном исследовании показано, что на терапию МСК  отвечают более половины пациентов со стероид-резистентной острой РТПХ.

Пациенты и методы

В исследование включены пациенты от 6 до 53 лет с ОЛЛ (n=9), ОМЛ (n=7), НХЛ (n=3), МДС (n=2) и ХМЛ (n=3), которым в период с октября 2005 по май 2008 была выполнена аллогенная ТГСК от родственного (n=5) или неродственного доноров (n=19). Для приживления ГСК и профилактики острой РТПХ 8 пациентам проведена ко-трансплантация МСК и ГСК. Шестнадцать пациентов получили изолированное введение МСК для лечения стероид-резистентной РТПХ. Десяти пациентам осуществлено одно введение МСК, пять пациентов два введения и один пациент получил три введения МСК. Процесс выделения и культивирования МСК осуществляли в компании «Транс Технологии» (лицензия № 99-01-002224 от 14.07.2005).

Результаты

В случае выполнения ко-трансплантации приживление лейкоцитов зарегистрировано на 21 день (от 16 до 38), тромбоцитов на 24 день (от 14 до 45). Острую РТПХ 0-I степеней наблюдали в 85,8% ко-трансплантаций, что не требовало дополнительной терапии, острая РТПХ II-IV развилась у 14,2 % пациентов. У всех пациентов хронической РТПХ не было. Инфекционные осложнения зарегистрированы у 2 пациентов (25%). Общая безрецидивная 2,5-летняя выживаемость составила 71%.
Результаты применения МСК для терапии РТПХ представлены в таблице 1.

974b56410a.jpg
Таблица 1. Результаты применения МСК для терапии РТПХ. 

Выводы

1. Инфузии МСК были безопасны, не сопровождались немедленными реакциями во время введения или отсроченными МСК-ассоциированными токсичностями.
2. Инфузия МСК перед аллоТГСК не влияли на приживление трансплантата ГСК.
3. Инфузия МСК при ко-трансплантации в режиме кондиционирования может предотвратить развитие тяжелых форм острой или хронической РТПХ.
4. Инфузия МСК для лечения резистентной острой РТПХ может быть эффективным у ряда пациентов.
5. Использование МСК перед аллоТГСК не увеличивало частоту рецидивов основного заболевания.
6. Использование МСК более эффективно у пациентов, получивших миелоаблативный режим кондиционирования и профилактику острой РТПХ с применением АЛГ.
7. Необходимо проведение дальнейших рандомизированных клинических исследований для оценки терапевтического эффекта МСК у пациентов после аллоТГСК и определения факторов, оказывающих влияние на эффективность МСК терапии.

Статьи о терапии мезенхимными клетками

Трансплантация кроветворных стволовых клеток при рассеянном склерозе

Загрузить версию в PDF

Ю. Л. Шевченко, А. А. Новик, А. Н. Кузнецов, Б. В. Афанасьев, И. А. Лисуков, O. А. Рукавицын, А. А. Мясников,
В. Я. Мельниченко, Д. А. Федоренко, T. И. Ионова, Р. А. Иванов, Г. Городокин

Введение

Рассеянный склероз (РС) – хроническое прогрессирующее заболевание центральной нервной системы, которое клинически проявляется мультисистемной неврологической симптоматикой, а патоморфологически характеризуется образованием множественных очагов демиелинизации в белом веществе головного и спинного мозга. Основным механизмом, приводящим к повреждению миелина, является опосредованная Т-лимфоцитами реакция гиперчувствительности замедленного типа, а непосредственными клетками-эффекторами иммунопатологического процесса – макрофаги.

Существующие методы лечения не позволяют достичь устойчивого терапевтического эффекта при рассеянном склерозе. Выдвигалась гипотеза, основанная на доклинических данных, о высокой эффективности аллогенной транплантации стволовых кроветворных клеток (ТСКК). Однако высокая посттрансплантационная летальность не позволила приступить к клиническим исследованиям данного вида терапии РС. По мнению большинства экспертов одним из наиболее перспективных методов лечения РС на сегодняшний день является высокодозная химиотерапия (ВДТ) с аутологичной трансплантацией стволовых кроветворных клеток (АуТСКК). Начиная с 1995 года, безопасность ВДТ+AyТКСК при РС была изучена в ряде клинических исследований. Тем не менее, объем информации о клинической эффективности данного метода и, особенно, о его влиянии на качество жизни больных РС, остается недостаточным. Кроме того, большинство пациентов, включенных в вышеупомянутые исследования, имели вторично-прогрессирующую форму РС и значительную степень инвалидизации со значением шкалы EDSS 4.5-8.5 баллов. К сожалению, даже полное прекращение активности иммунопатологического процесса у таких больных не может привести к значительному улучшению качества жизни. Поэтому вопрос об оптимальных сроках проведения трансплантации по-прежнему остается открытым.

В статье приведены результаты проспективного многоцентрового исследования безопасности и эффективности ВДТ+АуТКСК при РС, которое было начато в 1999 году и в настоящее время объединяет 5 крупных российских медицинских центров. Изучали влияние ВДТ+АуТКСК на клиническое течение и показатели качества жизни больных с разными формами и стадиями РС.

Обзорные статьи о терапии мезенхимными клетками

Иерархия мезенхимных стволовых клеток

Загрузить версию в PDF

Шипунова (Нифонтова) И. Н., Свинарева Д. А., Чертков И. Л., Дризе Н. И.

В работе изучали иерархию стромальных предшественников. Известно, что при переносе костномозгового цилиндра под капсулу почки сингенных мышей очаг эктопического кроветворения образуется за счет мезенхимных стволовых клеток (МСК) донора.
У облученных реципиентов образуется очаг в 2-3 раза большего размера за счет «индуцибельных» предшественников, более дифференцированных по сравнению с МСК. Наряду с упомянутыми тестами in vivo, широко применяется метод оценки концентрации клоногенных стромальных предшественников в культуре (колониеобразующих единиц фибробластных, КОЕф). Однако, взаимное расположение описанных клеток-предшественников в иерархии стромальных стволовых клеток неясно. В работе было проанализировано изменение количества указанных предшественников в очагах, образующихся у облученных реципиентов. Показано, что КОЕф являются самыми близкими из известных на сегодняшний день потомками МСК, а «индуцибельные» предшественники – мультипотентные стромальные предшественники находятся ниже в иерархии и являются клетками, непосредственно увеличивающими размер кроветворной территории в облученных реципиентах.

Обзорные статьи о терапии мезенхимными клетками

Лизат тромбоцитов для ускоренного размножения мезенхимных стромальных клеток человека

Загрузить версию в PDF

Ланге К., Чакироглу Ф., Шписс А., Каппалло-Оберманн Х., Цандер А. Р.

Мезенхимные стромальные клетки (МСК) из костного мозга человека являются перспективными кандидатами для новых способов лечения в трансплантационной и регенеративной медицине. Однако большинство протоколов культивирования включают фетальную телячью сыворотку (ФТС) в качестве источника факторов роста, которая является потенциальным источником чужеродных патогенов. Недавно было показано, что лизаты тромбоцитов (ЛТ) являются безопасной заменой животной сыворотки для размножения МСК, но образующиеся МСК слабо охарактеризованы. ЛТ содержит основные факторы роста, активно секретируемые тромбоцитами: PDGF-αα, -ββ, -αβ, TGF-β1 и -β2, VEGF и EGF. Мы создали легко воспроизводимый протокол для культуры МСК с добавлением ЛТ из концентратов тромбоцитов человека. Как КОЕ-Ф, так и общее число клеток существенно возрастали, по сравнению со стандартной средой, содержащей ФТС. Образующиеся клетки соответствуют всем критериям для МСК, таким, как: прилипание к пластику, веретенообразная форма, экспрессия поверхностных маркеров, отсутствие гемопоэтических маркеров и способность к дифференцировке в три ростка мезенхимных клеток. МСК человека, размноженные с ЛТ, проявляли благоприятные иммунологические свойства в культуре. Мы проверяли иммуномодулирующие свойства МСК, размноженных с ЛТ, в смешанной лимфоцитарной реакции, проводимой с мононуклеарамии крови человека, использованными как эффекторы или облученные стимуляторы в соотношении 1:1:1. При добавлении МСК к смешанной культуре отмечалось эффективное подавление Т-клеточная пролиферации (Р=0,000004), при среднем  уровне подавления 84,8±9,7%. Этот результат подтверждается дифференциальной экспрессией генов, показывающей снижение MHC II в МСК. Кроме того, профили генной экспрессии показали активацию генов клеточного цикла и репликации ДНК, наряду с подавлением генов, связанных с развитием, дифференцировкой, адипогенезом. Таким образом, ЛТ является безопасным компонентом сред для ускоренного и безопасного размножения МСК.

Статьи

Каспофунгин в качестве вторичной профилактики или терапии у больных при аллогенной трансплантации стволовых клеток с предыдущей историей или риском системных или инвазивных инфекций

Загрузить версию в PDF

Штуте Н., Забелина Т., Фезе Б., Хассенпфлюг В., Панзе Й., Вольшке К., Айюк Ф., Шидер Х., Ренгес Х., Кратохвилл А.,
фон Хинюбер Р., Эрттманн Р., Цандер А.Р., Крегер Н.

Состояние вопроса

Грибковые инфекции, вызванные Aspergillus or Candida, поражают, главным образом, легкие и являются основной причиной смертности при трансплантации стволовых клеток (ТСК). Больные с анамнезом или риском развития инвазивных грибковых инфекций (ИГИ), при аллогенной трансплантации стволовых клеток имеют высокий риск реактивации или прогрессии этих инфекций. В проспективном исследовании мы оценивали эффективность и безопасность каспофунгина в качестве вторичной профилактики или лечения персистирующего заболеванимя. Каспофунгин - это эхинокандин, нарушающий сборку клеточной стенки грибка посредством ингибирования β(1,3)-D-глюкансинтазы.

Методы

Двадцать восемь больных были включены в это исследование, все они были с острым лейкозом. В период ТСК, 16 больных не имели симптомов инфекции, тогда как в 12 случаях (с помощью компьютерной томографии) были отмечены признаки цветущих грибковых инфекций. До начала исследования проводился бронхоальвеолярный лаваж и УЗИ абдоминальной области. Контрольные определения галактоманнана Aspergillus и антител к Candida проводили еженедельно. Каспофунгин (по 50 мг вдень вводили внутривенно от начала кондиционирования до стабильного приживления трансплантата.

Результаты

Ни у одного из больных не проявлялось побочных эффектов, ведущих к прерыванию лечения каспофунгином. У 14 из 16 больных (88%) без признаков активной инфекции в начале трансплантации не наблюдалось грибковой инфекции после профилактики каспофунгином. В 10 из 12 случаев (83%) с радиологическими признаками активной грибковой инфекции, наблюдаемыми до трансплантации, были получены полные (n=4) или частичные (n=6) ответы после лечения каспофунгином.

Выводы

Применение каспофунгина безопасно и эффективно у больных высокого риска с ИГИ в анамнезе.

Статьи

Применение Иматиниба мезилата (Гливека) у нигерийцев с хроническим миелолейкозом

Загрузить версию в PDF

Дуросинми М. А., Фалуйи Дж. О., Ойекунле А. А. и соавт.

Цель работы

Оценить клинический ответ и токсичность иматиниба мезилата (Гливека) у нигерийских больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ).

Методы и клинический материал

С августа 2003 г. по август 2007 г. под наблюдением находились 98 больных с диагнозом ХМЛ (средний возраст 36 лет – от 11 до 65 лет), позитивных по Ph/bcr-abl, давших согласие на терапию, в том числе 56 мужчин и 42 женщины. Независимо от фазы заболевания, лечение Иматинибом проводилось в дозах 300-600 мг в день в госпитале OAU (Нигерия). Ответ на лечение оценивался по клиническим, гематологическим, цитогенетическим и/или молекулярным параметрам. Число клеток в крови проверяли каждые 2 недели в течение первых трех месяцев терапии. Кариотипирование повторяли каждые 6 месяцев. Регистрировали общую выживаемость и частоту полной гематологической ремиссии (ПГР) или большой цитогенетической ремиссии (БЦР, 1-34% Ph+ клеток).

Результаты

После 1 и 3 месяцев лечения полная гематологическая ремиссия была достигнута, соответственно, у 64% и 83% больных. При среднем сроке наблюдения 25 месяцев, частота ПГР и БЦР составляла 59% и 35%, соответственно. Спленомегалия и/или гепатомегалия менее 7 см от края ребер были прогностическими признаками в отношении ПГР (соответственно, p = 0.0006 и 0.034). После 12 месяцев наблюдения, общая выживаемость и выживаемость без прогрессии (ВБП) составляла, соответственно, 96% и 91%. Число бластных форм на периферии ниже 5% на момент диагноза и достижение ПГР через 6 мес. были ассоциированы со значительно лучшим выживанием (уровни p были, соответственно, 0.037 and 0.043).

Выводы

В сравнении с обычной химиотерапией и применением альфа-интерферона, как было ранее показано в Нигерии, иматиниб может индуцировать раннюю цитогенетическую ремиссию у Ph/bcr-abl- позитивных больных ХМЛ, при минимальных (побочных) заболеваниях.

Статьи

Влияние длительного введения Г-КСФ на клональный состав кроветворной ткани у химер

Загрузить версию в PDF

Шипунова (Нифонтова) И. Н., Сац Н. В., Свинарева Д. А., Петрова Т. В., Дризе Н. И., Савченко В. Г.

Введение

Предыдущие исследования показали, что кроветворение у мышей, которым пересаживали гемопоэтические стволовые клетки (ГСК), маркированными ретровирусным материалом, восстанавливается за счет множества короткоживущих клонов. Такая клональная кинетика предполагает истощение гемопоэтических клонов с последующим рекрутированием новых клонов путем их пролиферации (клональная сукцессия).

Материалы и методы

В данном исследовании, клональный гемопоэз изучали в модельных опытах на мышах, причем восстановление гемопоэза исследовали, вводя вирус-инфицированные клетки костного мозга (КМ), экспрессирующие ген АДА человека, или ГСК от донора другого пола. Экспериментальные животные подвергались облучению в летальной дозе и трансплантации маркированных ГСК от мышей-доноров. Определение селезеночных колоний (КОЕ-с) у мышей-реципиентов (самок) проводили по Тиллу и Мак-Каллоху. Происхождение КОЕ-с у мышей после трансплантации отслеживали по гену smc, сцепленному с полом, или по маркеру hADA, трансдуцированному в донорские клетки. Введение Г-КСФ после трансплантации проводили ежемесячно в течение полугода. 

Результаты

Повторное введение Г-КСФ не влияло на число лейкоцитов и долю гранулоцитов в периферической крови после трансплантации. Концентрация КОЕ-с в костном мозге трансплантированных мышей не изменялась после введения Г-КСФ. Полный донорский химеризм развивался редко, обычно наблюдалось частичное возвращение к кроветворению реципиента. Доля донорских КОЕ-с от месяца к месяцу колебалась между 35 и 88%. У трансплантированных мышей, не получавших Г-КСФ, доля донорских КОЕ-с была значительно выше, чем в группе, леченной Г-КСФ (71.2±6.9% против 56.5±5.3%, р<0.05). Доля донорских КОЕ-с, маркированных hADA, в группе, получавшей Г-КСФ, была более низкой и более стабильной, чем у «нелеченых» животных (20.6±7.1% versus 45.7±6.3%). Анализ отдельных клонов у «леченых» и «нелеченых» животных не выявил достоверных различий по их среднему содержанию. Однако величина клонов существенно снижалась при введении Г-КСФ, так как клоны были представлены меньшим числом колоний. Долгоживущие клоны (выявляемые после 3 мес.) не наблюдались после длительного введения Г-КСФ.

Заключение

Повторные инъекции Г-КСФ в фармакологических дозах вызывают дисбаланс в кроветворной системе. Долгосрочные последствия мобилизации ГСК посредством Г-КСФ следует внимательно отслеживать у потенциальных доноров.

Статьи

Определение мутации V617F в гене JAK2 у пациентов с неверифицированными хроническими миелопролиферативными заболеваниями

Загрузить версию в PDF

Сабурова И. Ю., Оникийчук Я. С., Зотова И. И., Сологуб Г. Н., Зарайский М. И.

Миелопролиферативные заболевания (МПЗ) представляют собой гетерогенную группу нарушений гемопоэза, сопровождающихся множественной гиперплазией клеток костного мозга. Их диагностика сложна и часто основывается на критериях исключения. Одним из наиболее диагностически значимых критериев для МПЗ является наличие мутации V617F в гене JAK2. Основная цель данной статьи – описание скринингового метода детекции V617F в гене JAK2, пригодного для первичной диагностики. Геномная ДНК от 58 пациентов с неверифицированным миелопролиферативным заболеванием выделялась по стандартной технологии. Детекция наличия мутации V617F в гене JAK2 проводилась с использованием двух пар праймеров, специфичных для мутантного и дикого типов генов JAK2. Использовалась клеточная линия UKE1 (Б. Фезе, Германия). Установлено, что представляемая методика выявляет наличие мутации V617F в гене JAK2 с диагностически значимой чувствительностью и специфичностью. Частота мутации в общей группе составила 29,3%. Процент встречаемости мутации V617F в гене JAK2 в группе первичных пациентов с неверифицированным диагнозом МПЗ составил 25,7%. Таким образом, разработанный нами метод определения мутации V617F в гене JAK2 может быть использован в качестве скрининговой диагностики у пациентов с неверифицированными хроническими миелопролиферативными заболеваниями.

Обзорные статьи

Генерация регуляторных Т-клеток посредством переноса Т-клеточных рецепторов

Загрузить версию в PDF

Райт Г.П., Кинг Дж-Вай-Линг, Штаусс Х.Дж.

Регуляторные Т-клетки (Трег) способны сильно подавлять
Т-клеточные реакции на стадии «наивных» клеток, эффекторной фазе и в клетках памяти. Кроме того, они также действуют на различные другие имунные клетки, включая В-клетки, дендритные клетки и моноциты. Многие аспекты Трег-опосредованной супрессии делают их идеальными кандидатами для антиген-направленного лечения иммунопатологических состояний. Наша и другие лаборатории показали, что перенос гена Т-клеточного рецептора (TCR) является эффективным способом переориентации специфичности основной популяции Т-клеток на определенный антиген. До сих пор существенные усилия вкладывались в применение переноса гена TCR в обычные CD8+ и CD4+ клетки, для того, чтобы запускать или усиливать иммунные реакции. Но до сих пор было немного исследований по потенциальному использованию генной терапииTCR на другом крае этого спектра – для контроля иммунопатологических процессов с применением Т-регуляторных клеток. Здесь мы кратко обсуждаем сведения, указывающие на то, что генерация  антиген-специфических Трег, в потенциале – через перенос гена TCR, может быть эффективным лечением различных форм иммунопатологии и кратко упоминаются трудности на пути понимания полного потенциала этого типа терапии. Проводилась адоптивная пересадка этих Т-регуляторных клеток облученным мышам, и дальнейшее размножение Трег с заполнением ниши может дать возможность для преимущественной экспансии клеток, специфичных к аллоантигенам. Имеется четкая корреляция в клинических условиях между толерантностью при трансплантации органов и уровням Трег. Здесь мы подчеркнули важность специфичности антигенов и предположили, что перенос гена TCR в размножающиеся поликлональные Т-клетки, продуцирующие FoxP3+ TCR, может обеспечить эффективный путь генерирования больших количеств антигенспецифических Трег-клеток.

Обзорные статьи

Успехи в переносе Т-клеточных рецепторов для иммунотерапии

Загрузить версию в PDF

Кинг Дж.-Вай-Линг, Райт Г.П., Штаусс Х.Дж.

Адоптивный перенос Т-клеток рассматривается как успешный клинический подход к терапии злокачественных заболеваний и вирусных инфекций. Однако одним из основных ограничений этой стратегии является сложность производства достаточных количеств антиген-специфических Т-клеток. Кроме того, инфузии донорских лимфоцитов часто ассоциированы с развитием болезни «трансплантат против хозяина» (РТПХ), что заставляет считаться со значительной заболеваемостью и смертностью. Перенос ретровирусного Т-клеточного рецептора (TCR) является привлекательной новой стратегией, при которой TCR является единственной детерминантой Т-клеточной специфичности. Введенные TCR нужной специфичности могут быть направлены против вирусных антигенов или слабо иммуногенных целевых молекул, как, например опухоль-ассоциированных антигенов, и недавние сведения о клинических испытаниях показали возможность этой технологии у больных меланомой. Более того, перенос гена TCR представляет собой также потенциальное средство генерации антиген-специфических регуляторных Т-клеток. В этом обзоре будет обращено особое внимание на современные достижения в области переноса гена TCR и исследования потенциальных клинических приложений этой стратегии.

Обзорные статьи

Интеграция исследований в области лейкозов в Европе: парадигма хронического миелолейкоза

Загрузить версию в PDF

Хельман Р., Саусселе С.

В обзорной статье рассматриваются проблемы в исследовании хронического миелолейкоза (ХМЛ). В частности, ввиду низкой частоты лейкозов в населении, необходима интеграция исследований в Европе путем создания кооперативных групп и исследовательских сетей.