Богдан О. Щеглов
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29346" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(197) "<p>Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(185) "Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29347" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6947) "<p style="text-align: justify;">В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена <i>NCSTN</i> и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Ген <i>NCSTN</i> локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген <i>NCSTN</i> уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.</p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;">По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Костный мозг, транскриптомика, ген <i>NCSTN</i>.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6741) "В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена NCSTN и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.
Материалы и методы
В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.
Результаты
Ген NCSTN локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген NCSTN уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.
Заключение
По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.
Ключевые слова
Костный мозг, транскриптомика, ген NCSTN.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29348" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29349" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(260) "<p>Bogdan O. Shcheglov </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(248) "Bogdan O. Shcheglov
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29350" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(298) "<p>School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(256) "School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Contact: Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29351" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4083) "<p style="text-align: justify;">Current studies provide data on the involvement of <i>NCSTN</i> gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The <i>NCSTN</i> gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Bone marrow, transcriptomics, <i>NCSTN</i> gene.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3889) "Current studies provide data on the involvement of NCSTN gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.
Materials and methods
At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.
Results
The NCSTN gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.
Conclusion
Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.
Keywords
Bone marrow, transcriptomics, NCSTN gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29352" ["VALUE"]=> string(96) "GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(96) "GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29353" ["VALUE"]=> string(4) "3030" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3030" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29354" ["VALUE"]=> string(4) "3031" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3031" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29349" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(260) "<p>Bogdan O. Shcheglov </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(248) "Bogdan O. Shcheglov
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(248) "Bogdan O. Shcheglov
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29351" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4083) "<p style="text-align: justify;">Current studies provide data on the involvement of <i>NCSTN</i> gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The <i>NCSTN</i> gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Bone marrow, transcriptomics, <i>NCSTN</i> gene.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3889) "Current studies provide data on the involvement of NCSTN gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.
Materials and methods
At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.
Results
The NCSTN gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.
Conclusion
Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.
Keywords
Bone marrow, transcriptomics, NCSTN gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3889) "Current studies provide data on the involvement of NCSTN gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.
Materials and methods
At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.
Results
The NCSTN gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.
Conclusion
Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.
Keywords
Bone marrow, transcriptomics, NCSTN gene.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29348" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29352" ["VALUE"]=> string(96) "GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(96) "GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(96) "GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29350" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(298) "<p>School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(256) "School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Contact: Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(256) "School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Contact: Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29345" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(270) "<p>Богдан О. Щеглов </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(258) "Богдан О. Щеглов
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(258) "Богдан О. Щеглов
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29347" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6947) "<p style="text-align: justify;">В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена <i>NCSTN</i> и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">Ген <i>NCSTN</i> локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген <i>NCSTN</i> уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.</p> <h3>Заключение</h3> <p style="text-align: justify;">По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Костный мозг, транскриптомика, ген <i>NCSTN</i>.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6741) "В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена NCSTN и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.
Материалы и методы
В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.
Результаты
Ген NCSTN локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген NCSTN уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.
Заключение
По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.
Ключевые слова
Костный мозг, транскриптомика, ген NCSTN.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6741) "В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена NCSTN и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.
Материалы и методы
В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.
Результаты
Ген NCSTN локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген NCSTN уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.
Заключение
По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.
Ключевые слова
Костный мозг, транскриптомика, ген NCSTN.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29346" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(197) "<p>Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(185) "Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(185) "Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
" } } } [1]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["ID"]=> string(4) "2131" ["~ID"]=> string(4) "2131" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["~NAME"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 12:28:01 pm" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 12:28:01 pm" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(177) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(177) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(2) "16" ["~SORT"]=> string(2) "16" ["CODE"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" ["~CODE"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2131" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2131" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(293) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставовGC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(6285) "<p style="text-align: justify;"> Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток <i>in vitro</i> проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов <i>COL2</i> в 10 раз (p=0,002), <i>СOL11 </i>в 3 раза (p=0,03) и снижение <i>СOL1 </i>в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×10<sup>6</sup> преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.</p> <h3>Заключение </h3> <p style="text-align: justify;"> Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит. </p> <br>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(198) "GC-07. Получение инъекционного имплантата мезенхимальных стволовых клеток для лечения остеоартроза суставов" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-07-poluchenie-inektsionnogo-implantata-mezenkhimalnykh-stvolovykh-kletok-dlya-lecheniya-osteoartr" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "19" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "20" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "21" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "22" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "23" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "24" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29355" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(193) "<p>Анна А. Жерносеченко<sup>1</sup>, Янина И. Исайкина<sup>1</sup>, Дмитрий В. Букач<sup>2</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(145) "Анна А. Жерносеченко1, Янина И. Исайкина1, Дмитрий В. Букач2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29356" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(473) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(431) "1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь
Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов.
Материалы и методы
МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток in vitro проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту.
Результаты
В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов COL2 в 10 раз (p=0,002), СOL11 в 3 раза (p=0,03) и снижение СOL1 в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×106 преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.
Заключение
Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года.
Ключевые слова
Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29358" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29359" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(153) "<p>Hanna A. Zhernasechanka<sup>1</sup>, Yanina I. Isaikina<sup>1</sup>, Dzmitry V. Bukach<sup>2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(105) "
Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29360" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(433) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(361) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29361" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3199) "<p style="text-align: justify;">Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">MSCs have been derived from bone marrow and expanded <i>in vitro</i> in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3<sup>rd</sup> severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of <i>COL2</i> by 10 times (p=0.002), <i>COL11</i> by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of <i>COL1</i> expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×10<sup>6</sup> cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2963) "Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.
Materials and methods
MSCs have been derived from bone marrow and expanded in vitro in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).
Results
The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3rd severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of COL2 by 10 times (p=0.002), COL11 by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of COL1 expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×106 cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.
Conclusion
The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis.
Keywords
Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29362" ["VALUE"]=> string(95) "GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(95) "GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> &array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29363" ["VALUE"]=> string(4) "3032" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3032" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29364" ["VALUE"]=> string(4) "3033" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3033" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29359" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(153) "<p>Hanna A. Zhernasechanka<sup>1</sup>, Yanina I. Isaikina<sup>1</sup>, Dzmitry V. Bukach<sup>2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(105) "Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(105) "Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29361" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3199) "<p style="text-align: justify;">Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">MSCs have been derived from bone marrow and expanded <i>in vitro</i> in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3<sup>rd</sup> severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of <i>COL2</i> by 10 times (p=0.002), <i>COL11</i> by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of <i>COL1</i> expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×10<sup>6</sup> cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2963) "Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.
Materials and methods
MSCs have been derived from bone marrow and expanded in vitro in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).
Results
The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3rd severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of COL2 by 10 times (p=0.002), COL11 by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of COL1 expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×106 cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.
Conclusion
The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis.
Keywords
Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(2963) "Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.
Materials and methods
MSCs have been derived from bone marrow and expanded in vitro in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).
Results
The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3rd severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of COL2 by 10 times (p=0.002), COL11 by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of COL1 expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×106 cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.
Conclusion
The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis.
Keywords
Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29358" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29362" ["VALUE"]=> string(95) "GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(95) "GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(95) "GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29360" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(433) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(361) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(361) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29355" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(193) "<p>Анна А. Жерносеченко<sup>1</sup>, Янина И. Исайкина<sup>1</sup>, Дмитрий В. Букач<sup>2</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(145) "Анна А. Жерносеченко1, Янина И. Исайкина1, Дмитрий В. Букач2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(145) "Анна А. Жерносеченко1, Янина И. Исайкина1, Дмитрий В. Букач2
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29357" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6285) "<p style="text-align: justify;"> Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток <i>in vitro</i> проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов <i>COL2</i> в 10 раз (p=0,002), <i>СOL11 </i>в 3 раза (p=0,03) и снижение <i>СOL1 </i>в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×10<sup>6</sup> преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.</p> <h3>Заключение </h3> <p style="text-align: justify;"> Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года. </p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;"> Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит. </p> <br>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6053) "Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов.
Материалы и методы
МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток in vitro проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту.
Результаты
В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов COL2 в 10 раз (p=0,002), СOL11 в 3 раза (p=0,03) и снижение СOL1 в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×106 преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.
Заключение
Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года.
Ключевые слова
Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6053) "
Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов.
Материалы и методы
МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток in vitro проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту.
Результаты
В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов COL2 в 10 раз (p=0,002), СOL11 в 3 раза (p=0,03) и снижение СOL1 в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×106 преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.
Заключение
Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года.
Ключевые слова
Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29356" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(473) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(431) "
1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь
1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь
Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29336" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(358) "<p>НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29337" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7208) "<p style="text-align: justify;">Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу <i>CCR5</i> в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*10<sup>6</sup>/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.</p> <p style="text-align: justify;"><h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени <i>CCR5</i> до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека. </p> <p style="text-align: justify;"><i>Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.</i></p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген <i>CCR5</i>. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6952) "Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.
Материалы и методы
Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу CCR5 в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*106/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.
Результаты
В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени CCR5 до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.
Выводы
Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека.
Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.
Ключевые слова
Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген CCR5.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29338" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29339" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(181) "<p>Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(169) "Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29340" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(199) "<p>RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(157) "RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29341" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4143) "<p style="text-align: justify;">Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the <i>CCR5</i> locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*10<sup>6</sup> cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target <i>CCR5</i> gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.</p> <p style="text-align: justify;"><i>The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk. </i></p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, <i>CCR5</i> gene.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3903) "Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.
Materials and methods
Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the CCR5 locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*106 cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.
Results
A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target CCR5 gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.
Conclusion
The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.
The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, CCR5 gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29342" ["VALUE"]=> string(203) "GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(203) "GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29343" ["VALUE"]=> string(4) "3028" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3028" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29344" ["VALUE"]=> string(4) "3029" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3029" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29339" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(181) "<p>Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(169) "Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(169) "Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29341" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4143) "<p style="text-align: justify;">Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the <i>CCR5</i> locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*10<sup>6</sup> cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target <i>CCR5</i> gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.</p> <p style="text-align: justify;"><i>The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk. </i></p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, <i>CCR5</i> gene.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3903) "Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.
Materials and methods
Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the CCR5 locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*106 cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.
Results
A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target CCR5 gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.
Conclusion
The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.
The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, CCR5 gene.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3903) "Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.
Materials and methods
Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the CCR5 locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*106 cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.
Results
A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target CCR5 gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.
Conclusion
The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.
The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, CCR5 gene.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29338" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29342" ["VALUE"]=> string(203) "GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(203) "GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(203) "GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29340" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(199) "<p>RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(157) "RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(157) "RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29335" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(301) "<p>Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(289) "Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(289) "Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29337" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7208) "<p style="text-align: justify;">Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу <i>CCR5</i> в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*10<sup>6</sup>/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.</p> <p style="text-align: justify;"><h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени <i>CCR5</i> до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека. </p> <p style="text-align: justify;"><i>Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.</i></p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген <i>CCR5</i>. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6952) "Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.
Материалы и методы
Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу CCR5 в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*106/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.
Результаты
В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени CCR5 до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.
Выводы
Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека.
Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.
Ключевые слова
Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген CCR5.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6952) "Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.
Материалы и методы
Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу CCR5 в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*106/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.
Результаты
В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени CCR5 до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.
Выводы
Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека.
Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.
Ключевые слова
Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген CCR5.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29336" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(358) "<p>НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(346) "НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
" } } } [3]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["ID"]=> string(4) "2128" ["~ID"]=> string(4) "2128" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["~NAME"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 11:50:15 am" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 11:50:15 am" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(177) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(177) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(2) "13" ["~SORT"]=> string(2) "13" ["CODE"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" ["~CODE"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2128" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2128" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(481) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставовGC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(5172) "<p style="text-align: justify;">Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Был разработан препарат <sup>188</sup>Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных <sup>188</sup>Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.</p> <h3>Ключевые слова</h3> <p style="text-align: justify;">Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.</p>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(310) "GC-04. Исследование терапевтического потенциала радиофармпрепарата на основе полимерных капсул с включением изотопа 188Re для лечения воспалительных заболеваний суставов" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(100) "gc-04-issledovanie-terapevticheskogo-potentsiala-radiofarmpreparata-na-osnove-polimernykh-kapsul-s-v" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "19" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "20" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "21" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "22" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "23" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "24" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29325" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(508) "<p>Алиса С. Постовалова<sup>1,2</sup>, Тимофей Е. Карпов<sup>1,2</sup>, Николай А. Костеников<sup>2</sup>, Дмитрий С. Сысоев<sup>2</sup>, Дмитрий О. Антуганов<sup>2</sup>, Дарья Р. Ахметова<sup>1,2</sup>, Альберт Р. Муслимов<sup>1</sup>, Александр С. Тимин<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(400) "Алиса С. Постовалова1,2, Тимофей Е. Карпов1,2, Николай А. Костеников2, Дмитрий С. Сысоев2, Дмитрий О. Антуганов2, Дарья Р. Ахметова1,2, Альберт Р. Муслимов1, Александр С. Тимин1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29326" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(434) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(392) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.
Материалы и методы
Был разработан препарат 188Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных 188Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.
Результаты
В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.
Выводы
Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.
Ключевые слова
Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29328" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29329" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(383) "<p>Alisa S. Postovalova<sup>1,2</sup>, Timofey E. Karpov<sup>1,2</sup>, Nikolay A. Kostenikov<sup>2</sup>, Dmitry S. Sysoev<sup>2</sup>, Dmitry O. Antuganov<sup>2</sup>, Darya R. Akhmetova<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(275) "Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2, Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29330" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(403) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(331) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29331" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2929) "<p style="text-align: justify;">Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">The <sup>188</sup>Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of <sup>188</sup>Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1<sup>st</sup>, 2<sup>nd</sup>, 3<sup>rd</sup> and 7<sup>th</sup> day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2699) "Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.
Materials and methods
The 188Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of 188Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1st, 2nd, 3rd and 7th day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data.
Results
The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.
Conclusion
According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.
Keywords
Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29332" ["VALUE"]=> string(171) "GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(171) "GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29333" ["VALUE"]=> string(4) "3026" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3026" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29334" ["VALUE"]=> string(4) "3027" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3027" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29329" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(383) "<p>Alisa S. Postovalova<sup>1,2</sup>, Timofey E. Karpov<sup>1,2</sup>, Nikolay A. Kostenikov<sup>2</sup>, Dmitry S. Sysoev<sup>2</sup>, Dmitry O. Antuganov<sup>2</sup>, Darya R. Akhmetova<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup> </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(275) "Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2, Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(275) "Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2, Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29331" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2929) "<p style="text-align: justify;">Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">The <sup>188</sup>Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of <sup>188</sup>Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1<sup>st</sup>, 2<sup>nd</sup>, 3<sup>rd</sup> and 7<sup>th</sup> day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.</p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(2699) "Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.
Materials and methods
The 188Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of 188Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1st, 2nd, 3rd and 7th day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data.
Results
The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.
Conclusion
According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.
Keywords
Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(2699) "Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.
Materials and methods
The 188Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of 188Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1st, 2nd, 3rd and 7th day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data.
Results
The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.
Conclusion
According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.
Keywords
Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29328" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29332" ["VALUE"]=> string(171) "GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(171) "GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(171) "GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29330" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(403) "<p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(331) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(331) "1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29325" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(508) "<p>Алиса С. Постовалова<sup>1,2</sup>, Тимофей Е. Карпов<sup>1,2</sup>, Николай А. Костеников<sup>2</sup>, Дмитрий С. Сысоев<sup>2</sup>, Дмитрий О. Антуганов<sup>2</sup>, Дарья Р. Ахметова<sup>1,2</sup>, Альберт Р. Муслимов<sup>1</sup>, Александр С. Тимин<sup>1,2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(400) "Алиса С. Постовалова1,2, Тимофей Е. Карпов1,2, Николай А. Костеников2, Дмитрий С. Сысоев2, Дмитрий О. Антуганов2, Дарья Р. Ахметова1,2, Альберт Р. Муслимов1, Александр С. Тимин1,2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(400) "Алиса С. Постовалова1,2, Тимофей Е. Карпов1,2, Николай А. Костеников2, Дмитрий С. Сысоев2, Дмитрий О. Антуганов2, Дарья Р. Ахметова1,2, Альберт Р. Муслимов1, Александр С. Тимин1,2
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29327" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(5172) "<p style="text-align: justify;">Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Был разработан препарат <sup>188</sup>Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных <sup>188</sup>Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.</p> <h3>Ключевые слова</h3> <p style="text-align: justify;">Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4990) "Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.
Материалы и методы
Был разработан препарат 188Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных 188Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.
Результаты
В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.
Выводы
Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.
Ключевые слова
Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(4990) "Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.
Материалы и методы
Был разработан препарат 188Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных 188Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.
Результаты
В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.
Выводы
Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.
Ключевые слова
Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29326" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(434) "<p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(392) "1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Анна В. Клыч1, Елена С. Лукойко1, Евгений В. Дмитриев1, Людмила В. Мовчан1, Николай А. Катин3, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29306" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(737) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия<br> <sup>3</sup> Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(677) "1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
3 Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь
Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии.
Материалы и методы
Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки MLL (KMT2A) гена (MLL-AF9), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли MLL-AF9 перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×106 клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания.
Результаты
Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте in vitro, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56).
Вывод
Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена MLL, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29308" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29309" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(409) "<p>Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Anna V. Klych<sup>1</sup>, Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Evgeniy V. Dmitriev<sup>1</sup>, Lyudmila V. Movchan<sup>1</sup>, Mikalai A. Katsin<sup>3</sup>, Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(289) "Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29310" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(514) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia<br> <sup>3</sup> Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(424) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
3 Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29311" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4171) "<p style="text-align: justify;"> Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy. </p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;"> A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for <i>MLL</i> (<i>KMT2A</i>) gene rearrangement (<i>MLL-AF9</i>), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for <i>MLL-AF9</i>, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×10<sup>6</sup> cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;"> It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence <i>in vivo</i>. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high <i>in vitro</i> cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56). </p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;"> We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of <i>MLL</i> gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;"> Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy. </p> <br>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3911) "Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
Materials and methods
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for MLL (KMT2A) gene rearrangement (MLL-AF9), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for MLL-AF9, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×106 cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
Results
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence in vivo. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high in vitro cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
Conclusions
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of MLL gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
Keywords
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29312" ["VALUE"]=> string(63) "GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(63) "GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29313" ["VALUE"]=> string(4) "3022" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3022" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29314" ["VALUE"]=> string(4) "3023" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3023" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29309" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(409) "<p>Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Anna V. Klych<sup>1</sup>, Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Evgeniy V. Dmitriev<sup>1</sup>, Lyudmila V. Movchan<sup>1</sup>, Mikalai A. Katsin<sup>3</sup>, Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(289) "
Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(289) "Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29311" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(4171) "<p style="text-align: justify;"> Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy. </p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;"> A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for <i>MLL</i> (<i>KMT2A</i>) gene rearrangement (<i>MLL-AF9</i>), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for <i>MLL-AF9</i>, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×10<sup>6</sup> cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells. </p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;"> It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence <i>in vivo</i>. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high <i>in vitro</i> cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56). </p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;"> We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of <i>MLL</i> gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen. </p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;"> Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy. </p> <br>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3911) "Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
Materials and methods
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for MLL (KMT2A) gene rearrangement (MLL-AF9), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for MLL-AF9, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×106 cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
Results
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence in vivo. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high in vitro cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
Conclusions
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of MLL gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
Keywords
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3911) "
Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
Materials and methods
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for MLL (KMT2A) gene rearrangement (MLL-AF9), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for MLL-AF9, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×106 cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
Results
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence in vivo. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high in vitro cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
Conclusions
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of MLL gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
Keywords
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29308" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29312" ["VALUE"]=> string(63) "GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report " ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(63) "GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report " ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(63) "GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report " } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29310" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(514) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia<br> <sup>3</sup> Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(424) "
1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
3 Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(424) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
3 Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29305" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(531) "<p>Александр А. Мигас<sup>1</sup>, Татьяна В. Шман<sup>1</sup>, Анна В. Клыч<sup>1</sup>, Елена С. Лукойко<sup>1</sup>, Евгений В. Дмитриев<sup>1</sup>, Людмила В. Мовчан<sup>1</sup>, Николай А. Катин<sup>3</sup>, Инна В. Пролесковская<sup>1</sup>, Ольга В. Алейникова<sup>2</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(411) "Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Анна В. Клыч1, Елена С. Лукойко1, Евгений В. Дмитриев1, Людмила В. Мовчан1, Николай А. Катин3, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова2
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(411) "Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Анна В. Клыч1, Елена С. Лукойко1, Евгений В. Дмитриев1, Людмила В. Мовчан1, Николай А. Катин3, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова2
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29307" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7531) "<p style="text-align: justify;"> Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии. </p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;"> Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки <i>MLL</i> (<i>KMT2A</i>) гена (<i>MLL-AF9</i>), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли <i>MLL-AF9</i> перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×10<sup>6</sup> клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания. </p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;"> Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте <i>in vitro</i>, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56). </p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;"> Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена <i>MLL</i>, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58. </p> <h3>Ключевые слова</h3> <p style="text-align: justify;"> CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58. </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(7289) "Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии.
Материалы и методы
Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки MLL (KMT2A) гена (MLL-AF9), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли MLL-AF9 перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×106 клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания.
Результаты
Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте in vitro, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56).
Вывод
Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена MLL, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(7289) "Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии.
Материалы и методы
Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки MLL (KMT2A) гена (MLL-AF9), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли MLL-AF9 перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×106 клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания.
Результаты
Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте in vitro, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56).
Вывод
Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена MLL, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29306" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(737) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия<br> <sup>3</sup> Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(677) "1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
3 Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь
1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
3 Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь
Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29316" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(233) "<p>Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(221) "Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29317" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6852) "<p style="text-align: justify;">Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.</p> <h3>Результаты и обсуждение</h3> <p style="text-align: justify;">Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6694) "Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.
Материалы и методы
В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.
Результаты и обсуждение
Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.
Выводы
Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.
Ключевые слова
ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29318" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29319" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(84) "<p>Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(72) "Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29320" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(288) "<p>Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(246) "Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29321" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3964) "<p style="text-align: justify;">The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.</p> <h3>Results and discussion</h3> <p style="text-align: justify;">We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.</p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;">The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.</p> <h3>Reference</h3> <p style="text-align: justify;">Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3772) "The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.
Materials and methods
We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.
Results and discussion
We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.
Conclusions
The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.
Reference
Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001
Keywords
NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29322" ["VALUE"]=> string(65) "GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(65) "GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29323" ["VALUE"]=> string(4) "3024" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3024" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29324" ["VALUE"]=> string(4) "3025" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3025" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29319" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(84) "<p>Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(72) "Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(72) "Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29321" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3964) "<p style="text-align: justify;">The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.</p> <h3>Results and discussion</h3> <p style="text-align: justify;">We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.</p> <h3>Conclusions</h3> <p style="text-align: justify;">The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.</p> <h3>Reference</h3> <p style="text-align: justify;">Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3772) "The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.
Materials and methods
We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.
Results and discussion
We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.
Conclusions
The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.
Reference
Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001
Keywords
NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3772) "The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.
Materials and methods
We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.
Results and discussion
We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.
Conclusions
The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.
Reference
Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001
Keywords
NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29318" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29322" ["VALUE"]=> string(65) "GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(65) "GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(65) "GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29320" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(288) "<p>Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(246) "Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(246) "Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29315" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(128) "<p>Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(116) "Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(116) "Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29317" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6852) "<p style="text-align: justify;">Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.</p> <h3>Результаты и обсуждение</h3> <p style="text-align: justify;">Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.</p> <h3>Выводы</h3> <p style="text-align: justify;">Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6694) "Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.
Материалы и методы
В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.
Результаты и обсуждение
Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.
Выводы
Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.
Ключевые слова
ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6694) "Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.
Материалы и методы
В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.
Результаты и обсуждение
Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.
Выводы
Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.
Ключевые слова
ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29316" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(233) "<p>Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(221) "Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(22) "Организации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(221) "Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
" } } } [6]=> array(49) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["~IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" ["ID"]=> string(4) "2125" ["~ID"]=> string(4) "2125" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["~NAME"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["ACTIVE_FROM"]=> NULL ["~ACTIVE_FROM"]=> NULL ["TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 11:07:49 am" ["~TIMESTAMP_X"]=> string(22) "12/05/2022 11:07:49 am" ["DETAIL_PAGE_URL"]=> string(158) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status/" ["~DETAIL_PAGE_URL"]=> string(158) "/en/archive/tom-11-nomer-3/-xvi-/gennaya-i-kletochnaya-terapiya-gc-01-gc-07/gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status/" ["LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["~LIST_PAGE_URL"]=> string(12) "/en/archive/" ["DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["~DETAIL_TEXT"]=> string(0) "" ["DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~DETAIL_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["~PREVIEW_TEXT"]=> string(0) "" ["PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["~PREVIEW_TEXT_TYPE"]=> string(4) "text" ["PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["~PREVIEW_PICTURE"]=> NULL ["LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["~LANG_DIR"]=> string(4) "/ru/" ["SORT"]=> string(2) "10" ["~SORT"]=> string(2) "10" ["CODE"]=> string(81) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status" ["~CODE"]=> string(81) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status" ["EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2125" ["~EXTERNAL_ID"]=> string(4) "2125" ["IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["~IBLOCK_TYPE_ID"]=> string(7) "journal" ["IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["~IBLOCK_CODE"]=> string(7) "volumes" ["IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["~IBLOCK_EXTERNAL_ID"]=> string(1) "2" ["LID"]=> string(2) "s2" ["~LID"]=> string(2) "s2" ["EDIT_LINK"]=> NULL ["DELETE_LINK"]=> NULL ["DISPLAY_ACTIVE_FROM"]=> string(0) "" ["IPROPERTY_VALUES"]=> array(18) { ["ELEMENT_META_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["ELEMENT_META_KEYWORDS"]=> string(0) "" ["ELEMENT_META_DESCRIPTION"]=> string(191) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статусGC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(6874) "<p style="text-align: justify;">Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток <i>ex vivo</i> составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×10<sup>6</sup> CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента. </p> <p style="text-align: justify;">Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).</p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;">Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.</p>" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_META_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_META_KEYWORDS"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_META_DESCRIPTION"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(85) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status-img" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_ALT"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_TITLE"]=> string(130) "GC-01. Анти-CD19 CAR T-клеточная терапия в Республике Беларусь. Текущий статус" ["SECTION_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(85) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status-img" ["ELEMENT_PREVIEW_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(85) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status-img" ["ELEMENT_DETAIL_PICTURE_FILE_NAME"]=> string(85) "gc-01-anti-cd19-car-t-kletochnaya-terapiya-v-respublike-belarus-tekushchiy-status-img" } ["FIELDS"]=> array(1) { ["IBLOCK_SECTION_ID"]=> string(3) "227" } ["PROPERTIES"]=> array(18) { ["KEYWORDS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "19" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:46:01" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "KEYWORDS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "19" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "4" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "Y" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "Y" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(27) "Ключевые слова" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["SUBMITTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "20" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "SUBMITTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "20" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Дата подачи" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["ACCEPTED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "21" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(8) "ACCEPTED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "21" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(25) "Дата принятия" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["PUBLISHED"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "22" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 17:21:42" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "PUBLISHED" ["DEFAULT_VALUE"]=> NULL ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "22" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(8) "DateTime" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Дата публикации" ["~DEFAULT_VALUE"]=> NULL } ["CONTACT"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "23" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 14:43:05" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(14) "Контакт" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "CONTACT" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "23" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(14) "Контакт" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHORS"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "24" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:45:07" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "AUTHORS" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "E" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "Y" ["XML_ID"]=> string(2) "24" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "3" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(13) "EAutocomplete" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(9) { ["VIEW"]=> string(1) "E" ["SHOW_ADD"]=> string(1) "Y" ["MAX_WIDTH"]=> int(0) ["MIN_HEIGHT"]=> int(24) ["MAX_HEIGHT"]=> int(1000) ["BAN_SYM"]=> string(2) ",;" ["REP_SYM"]=> string(1) " " ["OTHER_REP_SYM"]=> string(0) "" ["IBLOCK_MESS"]=> string(1) "N" } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> bool(false) ["VALUE"]=> bool(false) ["DESCRIPTION"]=> bool(false) ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> bool(false) ["~DESCRIPTION"]=> bool(false) ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29295" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(480) "<p>Елена С. Лукойко<sup>1</sup>, Александр А. Мигас<sup>1</sup>, Татьяна В. Шман<sup>1</sup>, Игорь Н. Северин<sup>2</sup>, Ольга А. Каленик<sup>2</sup>, Наталья Н. Конопля<sup>2</sup>, Инна В. Пролесковская<sup>1</sup>, Ольга В. Алейникова<sup>3</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(372) "Елена С. Лукойко1, Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Игорь Н. Северин2, Ольга А. Каленик2, Наталья Н. Конопля2, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова3
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29296" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(810) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>3</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(750) "1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь
3 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.
Материалы и методы
Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток ex vivo составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×106 CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.
Результаты
В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента.
Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).
Вывод
Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["DOI"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29298" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["AUTHOR_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29299" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(365) "<p>Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Igor N. Severin<sup>2</sup>, Olga A. Kalenik<sup>2</sup>, Natalya N. Konoplia<sup>2</sup>, Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>3</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(257) "Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29300" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(516) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>3</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(426) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus
3 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
Contact: Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["SUMMARY_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29301" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3618) "<p style="text-align: justify;">Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After <i>ex vivo</i> cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×10<sup>6</sup> cells <i>per</i> kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion <i>in vivo</i> observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20). </p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3412) "Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.
Materials and methods
Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After ex vivo cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×106 cells per kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.
Results
CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion in vivo observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20).
Conclusion
The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.
Keywords
CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["NAME_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29302" ["VALUE"]=> string(61) "GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(61) "GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["FULL_TEXT_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "42" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-07 20:29:18" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(12) "FULL_TEXT_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "42" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(23) "Полный текст" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } } ["PDF_RU"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "43" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "43" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29303" ["VALUE"]=> string(4) "3020" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3020" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF RUS" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["PDF_EN"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "44" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-09 16:05:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(6) "PDF_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "F" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "44" ["FILE_TYPE"]=> string(18) "doc, txt, rtf, pdf" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29304" ["VALUE"]=> string(4) "3021" ["DESCRIPTION"]=> NULL ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(4) "3021" ["~DESCRIPTION"]=> NULL ["~NAME"]=> string(7) "PDF ENG" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" } ["NAME_LONG"]=> array(36) { ["ID"]=> string(2) "45" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2023-04-13 00:55:00" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "NAME_LONG" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "45" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(80) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> NULL ["VALUE"]=> string(0) "" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(0) "" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(72) "Название (для очень длинных заголовков)" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TYPE"]=> string(4) "HTML" ["TEXT"]=> string(0) "" } } } ["DISPLAY_PROPERTIES"]=> array(8) { ["AUTHOR_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "37" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(6) "Author" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "37" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29299" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(365) "<p>Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Igor N. Severin<sup>2</sup>, Olga A. Kalenik<sup>2</sup>, Natalya N. Konoplia<sup>2</sup>, Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>3</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(257) "Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(6) "Author" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(257) "Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
" } ["SUMMARY_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "39" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "39" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29301" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3618) "<p style="text-align: justify;">Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.</p> <h3>Materials and methods</h3> <p style="text-align: justify;">Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After <i>ex vivo</i> cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×10<sup>6</sup> cells <i>per</i> kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.</p> <h3>Results</h3> <p style="text-align: justify;">CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion <i>in vivo</i> observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20). </p> <h3>Conclusion</h3> <p style="text-align: justify;">The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.</p> <h2>Keywords</h2> <p style="text-align: justify;">CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.</p> " ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(3412) "Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.
Materials and methods
Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After ex vivo cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×106 cells per kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.
Results
CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion in vivo observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20).
Conclusion
The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.
Keywords
CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(21) "Description / Summary" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(3412) "Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.
Materials and methods
Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After ex vivo cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×106 cells per kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.
Results
CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion in vivo observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20).
Conclusion
The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.
Keywords
CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.
" } ["DOI"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "28" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2016-04-06 14:11:12" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(3) "DOI" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(3) "DOI" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "28" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29298" ["VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(3) "DOI" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(38) "10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132" } ["NAME_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "40" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-03 10:49:47" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(4) "Name" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(7) "NAME_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "80" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "40" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "Y" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> NULL ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> NULL ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29302" ["VALUE"]=> string(61) "GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> string(61) "GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(4) "Name" ["~DEFAULT_VALUE"]=> string(0) "" ["DISPLAY_VALUE"]=> string(61) "GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state" } ["ORGANIZATION_EN"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "38" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:02:59" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Organization" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_EN" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "38" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29300" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(516) "<p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>3</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia</p><br> <p><b>Contact:</b> Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com </p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(426) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus
3 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
Contact: Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Organization" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(426) "1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus
3 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
Contact: Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com
" } ["AUTHOR_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "25" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(12) "Авторы" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(9) "AUTHOR_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "25" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29295" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(480) "<p>Елена С. Лукойко<sup>1</sup>, Александр А. Мигас<sup>1</sup>, Татьяна В. Шман<sup>1</sup>, Игорь Н. Северин<sup>2</sup>, Ольга А. Каленик<sup>2</sup>, Наталья Н. Конопля<sup>2</sup>, Инна В. Пролесковская<sup>1</sup>, Ольга В. Алейникова<sup>3</sup></p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(372) "Елена С. Лукойко1, Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Игорь Н. Северин2, Ольга А. Каленик2, Наталья Н. Конопля2, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова3
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(12) "Авторы" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(372) "Елена С. Лукойко1, Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Игорь Н. Северин2, Ольга А. Каленик2, Наталья Н. Конопля2, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова3
" } ["SUMMARY_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "27" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(10) "SUMMARY_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "27" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29297" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6874) "<p style="text-align: justify;">Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.</p> <h3>Материалы и методы</h3> <p style="text-align: justify;">Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток <i>ex vivo</i> составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×10<sup>6</sup> CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.</p> <h3>Результаты</h3> <p style="text-align: justify;">В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента. </p> <p style="text-align: justify;">Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).</p> <h3>Вывод</h3> <p style="text-align: justify;">Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.</p> <h2>Ключевые слова</h2> <p style="text-align: justify;">CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(6670) "Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.
Материалы и методы
Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток ex vivo составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×106 CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.
Результаты
В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента.
Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).
Вывод
Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.
" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["~DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["~NAME"]=> string(29) "Описание/Резюме" ["~DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DISPLAY_VALUE"]=> string(6670) "Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.
Материалы и методы
Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток ex vivo составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×106 CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.
Результаты
В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента.
Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).
Вывод
Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.
" } ["ORGANIZATION_RU"]=> array(37) { ["ID"]=> string(2) "26" ["TIMESTAMP_X"]=> string(19) "2015-09-02 18:01:20" ["IBLOCK_ID"]=> string(1) "2" ["NAME"]=> string(22) "Организации" ["ACTIVE"]=> string(1) "Y" ["SORT"]=> string(3) "500" ["CODE"]=> string(15) "ORGANIZATION_RU" ["DEFAULT_VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(0) "" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["PROPERTY_TYPE"]=> string(1) "S" ["ROW_COUNT"]=> string(1) "1" ["COL_COUNT"]=> string(2) "30" ["LIST_TYPE"]=> string(1) "L" ["MULTIPLE"]=> string(1) "N" ["XML_ID"]=> string(2) "26" ["FILE_TYPE"]=> string(0) "" ["MULTIPLE_CNT"]=> string(1) "5" ["TMP_ID"]=> NULL ["LINK_IBLOCK_ID"]=> string(1) "0" ["WITH_DESCRIPTION"]=> string(1) "N" ["SEARCHABLE"]=> string(1) "N" ["FILTRABLE"]=> string(1) "N" ["IS_REQUIRED"]=> string(1) "N" ["VERSION"]=> string(1) "1" ["USER_TYPE"]=> string(4) "HTML" ["USER_TYPE_SETTINGS"]=> array(1) { ["height"]=> int(200) } ["HINT"]=> string(0) "" ["PROPERTY_VALUE_ID"]=> string(5) "29296" ["VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(810) "<p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>3</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия</p>" ["TYPE"]=> string(4) "HTML" } ["DESCRIPTION"]=> string(0) "" ["VALUE_ENUM"]=> NULL ["VALUE_XML_ID"]=> NULL ["VALUE_SORT"]=> NULL ["~VALUE"]=> array(2) { ["TEXT"]=> string(750) "1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь
3 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь
3 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Bogdan O. Shcheglov
Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2, Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29345
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Богдан О. Щеглов
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Богдан О. Щеглов
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29346
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Школа медицины, Медицинский центр, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29347
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена <i>NCSTN</i> и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.</p>
<h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">Ген <i>NCSTN</i> локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген <i>NCSTN</i> уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.</p>
<h3>Заключение</h3>
<p style="text-align: justify;">По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.</p>
<h2>Ключевые слова</h2>
<p style="text-align: justify;">Костный мозг, транскриптомика, ген <i>NCSTN</i>.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => В ряде исследований ученых приводятся данные об участии в различных неопластических процессах гена NCSTN и кодируемого им белка никастрина – основной субъединицы γ-секретазы. Также показана его роль в регулировании иммунной системы организма. Поэтому изучение функционирования данного гена может дать возможность понять механизм развития новообразований различной локализации и снизить риск развития неоплазм у пациентов с нарушением функций костного мозга.
Материалы и методы
В начальной стадии исследования было проведено сравнение каждой из аннотаций изоформ гена с данными mRNAs и ESTs для выбора проаннотированной версии. После этого анализа можно заключить, что каждая аннотация содержит изоформы, несущие лишнюю информацию о гене, а именно – появление дополнительных экзонов, не отображенных в mRNAs и ESTs или отсутствие белок-кодирующих экзонов. В дальнейшем был проведен анализ гена в плане его способности к кодированию белков, транскрипции, экспрессии и взаимодействию с белками.
Результаты
Ген NCSTN локализован на хромосоме 21, он состоит из 17 экзонов и 16 интронов и находится на плюс-цепи, что косвенно говорит об его белок-кодирующей функции. Ген NCSTN уникален вследствие наличия повторов только в интронах и не имеет псевдогенов, по данным базы BLAST. Ген проаннотирован правильно, структура гена корректна, так как пики трека транскрипции совпадают с экзонами изоформ аннотаций. При исследовании гена на способность кодировать белки можно заключить, что, для каждого экзона, полученные экспериментально пики сигналов трансляции соответствуют проаннотированным белок-кодирующим областям гена. Большинство пиков рибосомального профайлинга соотносится с транслируемыми пептидами, что говорит о том, что данный ген обладает белок-кодирующей функцией. Анализ гена проводился по данным трека RNA-seq и пиков CAGE, полученным на клеточной культуре A549. Анализируя данные RNA-seq, можно сказать, что 65,4% РНК остается в ядре, а в цитоплазму выходит 34,6%. По данным CAGE, 72,4% РНК остается в ядре, и 27,6% выходит в цитоплазму, т.е. представленные данные базы RNA-seq и CAGE сопоставимы. В цитоплазме содержится РНК, транслирующая белок. Исследование гена на мутации по базе данных OMIM Genes указывают на то, что данный ген имеет мутации и может вызывать наследственные заболевания аутосомно-доминантного типа, проявляющиеся семейной инверсией акне, семейным гнойным гидраденитом при нарушенной функции костного мозга. Кодируемые белки расщепляют интегральные мембранные белки, включая рецепторы Notch и белок-предшественник бета-амилоида, что, вероятно, является стабилизирующим кофактором, необходимым для сборки комплекса гамма-секретазы. Также, по данным трека Gene Interactions, этот ген контролирует белок-белковые взаимодействия, которые нарушены при мутациях в гене и отсутствии конечного функционального белкового продукта.
Заключение
По результатам проведенного анализа можно сказать, что точечные мутации данного гена, в том числе и те, которые встречаются в опухолевых образцах, совпадают с кодирующими частями экзонов. Кроме того, база данных COSMIC Regions содержит информацию о точечных мутациях этого гена, встречающихся в опухолях: злокачественных меланомах, аденомах, карциномах, саркомах, глиомах, лимфоидных новообразованиях. Эти заболевания возникают не только из-за точечных мутаций в кодирующей части гена, что отображено в базах данных СOSMIC Regions, ClinVar Short Variants, HGMD Variants, но и за счет делеций и дупликаций, затрагивающих всю последовательность данного гена, что отображено в базах ClinVar Long Varlants, Development Delay.
Ключевые слова
Костный мозг, транскриптомика, ген NCSTN.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29348
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29349
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Bogdan O. Shcheglov
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Bogdan O. Shcheglov
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29350
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia</p><br>
<p><b>Contact:</b> Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Contact: Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29351
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Current studies provide data on the involvement of <i>NCSTN</i> gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.</p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">The <i>NCSTN</i> gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.</p>
<h3>Conclusion</h3>
<p style="text-align: justify;">Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.</p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">Bone marrow, transcriptomics, <i>NCSTN</i> gene.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Current studies provide data on the involvement of NCSTN gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.
Materials and methods
At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.
Results
The NCSTN gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.
Conclusion
Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.
Keywords
Bone marrow, transcriptomics, NCSTN gene.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29352
[VALUE] => GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-06. In silico study of mutagenic effect of NCSTN gene in development of bone marrow neoplasms
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29353
[VALUE] => 3030
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3030
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29354
[VALUE] => 3031
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3031
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Bogdan O. Shcheglov
School of Medicine, Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia
Contact: Bogdan O. Shcheglov, phone: +7 (914) 718-98-25, e-mail: b.shcheglov@mail.ru
Current studies provide data on the involvement of NCSTN gene encoding nicastrin (the major subunit of γ-secretase), in various neoplastic processes. It has also been shown to play a role in regulation of immune cells. Therefore, the study on the functioning of this gene may provide an opportunity to understand the mechanism of neoplasia in different tissues, and to reduce the risk of malignancies in patients with bone marrow dysfunction.
Materials and methods
At the beginning of this study, each of the gene isoform annotations was compared with mRNAs and ESTs data to select the annotated version. After this analysis, we may state that each annotation has isoforms carrying extra information about the gene, e.g., additional exons which are not mapped in mRNAs and ESTs, or absence of protein-encoding exons. These data were further analyzed for ability of this gene to encode proteins, transcription, expression, and interaction with proteins.
Results
The NCSTN gene is present on the chromosome 21. It includes 17 exons and 16 introns being located on the plus chain, thus indirectly indicating to its protein-encoding function. The gene is unique due to the presence of repeats only in introns, there are no pseudogenes, according to the BLAST database. The gene is annotated correctly, and its structure is true, since the peaks of the transcription track coincide with exons of the annotated isoforms. When examining the gene for protein-coding ability, we may conclude that, for each exon, the signal translational peaks obtained experimentally correspond to the annotated protein-coding regions of the gene. Most peaks of the ribosomal profiling correlate with translated peptides, thus presuming this gene to have a protein-coding function. Analysis of the gene by RNA-seq track data and CAGE peaks was based on the results obtained in A549 cell culture. When analyzing the RNA-seq data, we may suggest that 65.4% of RNA remains in the nucleus and 34.6% is released to the cytoplasm. According to the CAGE data, 72.4% of RNA remains in the nucleus and 27.6% migrates to the cytoplasm. The presented RNA-seq and CAGE data were compatible, i.e., the cytoplasm contains protein-translating RNA. Examination of the gene for mutations in the OMIM Genes database indicates that the gene has a mutation and can cause autosomal dominant inherited disorders manifesting by familial acne, familial purulent hydradenitis with bone marrow dysfunction. The encoded proteins cleave integral membrane proteins, including Notch receptors and beta-amyloid precursor protein, thus, probably, being a stabilizing cofactor required for assembly of the gamma-secretase complex. Similarly, according to the Gene Interactions track, this gene controls some protein-protein interactions that would be disrupted by gene mutations in absence of a final functional protein product.
Conclusion
Upon the data analysis, we may conclude that the point mutations of the gene, including those found in tumor samples, coincide with the coding sequences of exons. Moreover, the COSMIC Regions database contains information on the point mutations of this gene found in tumors, e.g., malignant melanomas, adenomas, carcinomas, sarcomas, gliomas, and in lymphoid neoplasms. These disorders arise not only due to point mutations in the coding gene sequences, as displayed in the COSMIC Regions, ClinVar Short Variants, and HGMD Variants databases, but also occur due to deletions and duplications affecting the entire length of this gene, as displayed in the ClinVar Long Variants and Development Delay databases.
Keywords
Bone marrow, transcriptomics, NCSTN gene.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29355
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Анна А. Жерносеченко<sup>1</sup>, Янина И. Исайкина<sup>1</sup>, Дмитрий В. Букач<sup>2</sup> </p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Анна А. Жерносеченко1, Янина И. Исайкина1, Дмитрий В. Букач2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29356
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр травматологии и ортопедии, Минск, Республика Беларусь
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29357
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">
Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов.
</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">
МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток <i>in vitro</i> проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту.
</p>
<h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">
В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов <i>COL2</i> в 10 раз (p=0,002), <i>СOL11 </i>в 3 раза (p=0,03) и снижение <i>СOL1 </i>в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×10<sup>6</sup> преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.</p>
<h3>Заключение
</h3>
<p style="text-align: justify;">
Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года.
</p>
<h2>Ключевые слова</h2>
<p style="text-align: justify;">
Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит.
</p>
<br>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
Из-за ограниченной способности резидентных хондроцитов восстанавливать поврежденную хрящевую ткань, клеточная терапия на основе мезенхимальных стволовых клеток (МСК) была предложена в качестве нового терапевтического подхода к восстановлению хряща. Целью работы являлась разработка способа получения инъекционного имплантата на основе МСК и оценка эффективности его применение для лечения остеоартроза у пациентов.
Материалы и методы
МСК выделяли из костного мозга здоровых доноров, экспансию клеток in vitro проводили в среде DMEM, содержащей 10% ЭТС-МСК. После 2-го пассажа к клеткам добавляли 10 нг/мл TGFβ3, 100 нг/мл IGF, 100 нM дексаметазона (Life Technologies, США) и культивировали в течение 7 суток. Инъекционные имплантаты МСК получали непосредственно перед введением пациентам, соединяя суспензию МСК с 1%-ным растворам гиалуроновой кислоты в соотношении 1:1. Включение программы хондрогенной дифференцировки МСК подтверждали методами иммунофлуоресцентного окрашивания и количественной ПЦР. Клиническую эффективность оценивали по изменениям уровня боли по шкале ВАШ (визуально-аналоговая шкала) и показателя функциональной активности сустава по шкале WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index) через 6 и 12 месяцев после введения клеток пациенту.
Результаты
В исследование включено 12 пациентов с остеоартрозом 2-3-й стадии. МСК, полученные из костного мозга доноров, обладали 98%-ной жизнеспособностью (97,5; 99,5) и характерным иммунофенотипом (более 95% клеток экспрессировали антигены CD90, CD105 и CD73). Доказательством включения хондрогенной программы после воздействия хондроиндукторов были присутствие в полученной культуре клеток, активно синтезирующих коллаген II типа и аггрекан, выявленных методом иммунофлуоресценции, рост уровня экспрессии генов COL2 в 10 раз (p=0,002), СOL11 в 3 раза (p=0,03) и снижение СOL1 в 5 раз (р=0,03). Отмечалось изменение морфологии клеток с веретенообразной на более округлую форму (сobblestone-like). Всего было получено 12 биомедицинских клеточных продуктов, содержащих 31,0 (25,0; 37,5)×106 преддифференцированных в хондрогенном направлении аллогенных МСК. Инъекционные имплантаты МСК в 1% гиалуроновой кислоте вводили пациентам в коленный сустав интраартикулярнo в объеме 0,95 (0,65; 1,05) мл. Оценка динамики величины показателя ВАШ продемонстрировала снижение у всех пациентов выраженности боли с 5 (4; 6) см до 2,5 (2; 3,5) см через 6 месяцев после введения и сохранение эффекта у пациентов на уровне 2 (1; 4) см через 12 месяцев (p <0,05). Индекс WOMAC, который до начала клеточной терапии составлял 56,5 (37; 63) баллов, через 6 месяцев улучшился до 31 (22; 41) и остался на уровне 31 (9; 48) (p <0,05) через 12 месяцев. Положительный ответ (снижение не менее, чем на 8 баллов) зафиксирован у 70% пациентов через 1 год. Осложнений общего или местного характера у пациентов после введения клеточного имплантата в коленный сустав не отмечалось.
Заключение
Результаты клинического исследования подтверждают эффективность применения аллогенных преддифференцированных в хондрогенном направлении МСК в гиалуроновой кислоте, введенных интраартикулярно, при лечении остеоартроза с сохранением терапевтического эффекта не менее года.
Ключевые слова
Мезенхимные стволовые клетки, клеточная терапия, остеоартрит.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29358
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29359
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Hanna A. Zhernasechanka<sup>1</sup>, Yanina I. Isaikina<sup>1</sup>, Dzmitry V. Bukach<sup>2</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29360
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29361
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">MSCs have been derived from bone marrow and expanded <i>in vitro</i> in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).</p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3<sup>rd</sup> severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of <i>COL2</i> by 10 times (p=0.002), <i>COL11</i> by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of <i>COL1</i> expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×10<sup>6</sup> cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.</p>
<h3>Conclusion</h3>
<p style="text-align: justify;">The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis. </p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.
Materials and methods
MSCs have been derived from bone marrow and expanded in vitro in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).
Results
The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3rd severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of COL2 by 10 times (p=0.002), COL11 by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of COL1 expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×106 cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.
Conclusion
The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis.
Keywords
Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29362
[VALUE] => GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-07. Production of injectable implant mesenchymal stem cells for treatment of osteoarthritis
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29363
[VALUE] => 3032
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3032
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29364
[VALUE] => 3033
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3033
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Hanna A. Zhernasechanka1, Yanina I. Isaikina1, Dzmitry V. Bukach2
1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Republican Scientific and Practical Center of Traumatology and Orthopedics, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Hanna A. Zhernasechanka, phone: +375 (29) 399-37-65, e-mail: sapphire.anna@gmail.com
Due to the restricted capacity of resident chondrocytes to regenerate injury of cartilage, stem cell-based therapies have been proposed as a novel therapeutic approach for cartilage repair. The aim of this work was to develop the method for injection of MSCs in the treatment of osteoarthritis.
Materials and methods
MSCs have been derived from bone marrow and expanded in vitro in DMEM with 10% FBS-MSC. Chondrogenic pre-differentiation of MSCs in 2D were obtained by culturing in DMEM with 10 ng/ml TGFβ3, 100 ng/ml IGF, 100 nM dexamethasone (Life Technologies, USA), 1% antibiotic for 7 days. The injectable implant was obtained by mixing predifferentiated MSCs with 1% hyaluronic acid in a ratio of 1:1. Chondrogenesis of MSCs was confirmed by immunofluorescence staining, PCR. The clinical efficacy of injectable implants was assessed by VAS (Visual Analogue Scale) and WOMAC (Western Ontario McMaster Universities OA Index).
Results
The study included twelve patients with osteoarthritis at the 2-3rd severity stage. The cells had high 98 (97.5; 99.5)% viability, phenotype of MSCs (more than 95% of cells had CD90, CD105, and CD73). Chondrogenesis after supplementation with the growth factors was proven by detection of the type II collagen and aggrecan synthesis by MSCs, as shown by immunofluorescence. A change in morphology MSCs from spindle-shaped to “cobblestone-like” was detached. We have shown an increased expression of COL2 by 10 times (p=0.002), COL11 by 3 times (p=0.03), along with 5-fold decrease of COL1 expression (p=0.03). A total of 12 clinical preparations of chondrogenic pre-differentiated MSCs with 1% hyaluronic acid were obtained, at the average number of 31.0 (25.0; 37.5)×106 cells in a mean volume of 0.95 (0.65; 1.05) mL. The cellular implants were injected to the patients intra-articularly. After a follow-up periods of 6 and 12 months, clinical effects were evaluated by means of VAS and WOMAC assessment scales. By the VAS scale, distinct changes were shown at the end of follow-up periods, i.e., from 5 cm (4; 6) to 2.5 cm (2; 3.5), and to 2 cm (1; 4), respectively (p <0.05). The data of WOMAC evaluation score showed improvement during the follow-up periods from 56.5 (37; 63) to 31 (22; 41) points, and to 31 (9; 48) respectively (p <0.05). Systemic or local complications were not observed in the patients after injections of implanted cells into the knee joint.
Conclusion
The results of this study confirm the efficacy of intra-articular injections of chondrogenically predifferentiated allogeneic MSCs in hyaluronic acid when treating patients with osteoarthritis.
Keywords
Mesenchymal stem cells, cell-based therapy, osteoarthritis.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29335
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Алена И. Шакирова, Тимофей Е. Карпов, Ярослава В. Комарова, Ольга С. Епифановская, Владислав С. Сергеев, Марина О. Попова, Кирилл В. Лепик, Александр Д. Кулагин
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29336
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский
государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29337
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу <i>CCR5</i> в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*10<sup>6</sup>/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.</p>
<p style="text-align: justify;"><h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени <i>CCR5</i> до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.</p>
<h3>Выводы</h3>
<p style="text-align: justify;">Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека. </p>
<p style="text-align: justify;"><i>Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.</i></p>
<h2>Ключевые слова</h2>
<p style="text-align: justify;">Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген <i>CCR5</i>.
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Генная терапия на основе трансплантации генетически модифицированных гемопоэтических стволовых и прогениторных клеток (ГСПК) с помощью инженерных нуклеаз (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) обладает мощным потенциалом для лечения ряда моногенных заболеваний человека. Основой такого метода лечения является вставка здоровой копии участка ДНК или целого трансгена в локус двуцепочечного разрыва, формируемого нуклеазой, доставляемого в виде донорской матрицы в различной форме. Известно, что важным фактором, влияющим на эффективность вставки, является структура и длина вносимой в клетку донорской ДНК-матрицы. Среди многих ее форм (одно- или двуцепочечная ДНК, кольцевая или линейная, вирусная или невирусная и т.д.) линейная двуцепочечная линейная ДНК представляет интерес для преклинической разработки геннотерапевтических клеточных продуктов, благодаря потенциальной эффективности и простоте производства. Ограничивающим фактором их применения является токсичность для первичных клеток человека, зависящая структурных параметров матриц [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. Целью данной работы является оптимизация структуры вносимой в клетку донорской матрицы в форме линейной двуцепочечной ДНК, используемой для гомологичной репарации TALEN-опосредованных целевых разрывов в ДНК, с целью повышения эффективности редактирования/вставки терапевтических трансгенов в клеточных линиях человека, являющихся наиболее приближенными моделями ГСПК.
Материалы и методы
Синтез различных вариантов донорских линейных ДНК-матриц проводили методом ПЦР плазмидной ДНК, кодирующей тансген GFP и домены гомологии к локусу CCR5 в месте формирования двуцепочечного разрыва длиной 400 пар нуклеотидов. Трансфекцию клеток К562 проводили в концентрации 3,3*106/мл клеток по заранее отработанному протоколу двухэтапной электропорации с использованием электропоратора Gene Pulser Xcell System (Bio-Rad, США). Концентрация мРНК при трансфекции составляла 25 мкг/мл. Концентрация донорских матриц составляла 20 мкг/мл. Исследовали следующие модификации донорских матриц: добавление в состав последовательности донорской матрицы последовательности, ингибирующей сенсоры внутриклеточного иммунного ответа на экзогенную ДНК или повреждение геномной ДНК (TLR9/AIM2/cGAS) – А151, а также стабилизация концов донорской матрицы фосфоротиоатными связями. Эффективность вставки трансгена и жизнеспособность клеток оценивали методом проточной цитофлуориметрии.
Результаты
В ходе работы был отработан протокол двухэтапной трансфекции, обеспечивающий эффективность нокаута целевой мишени CCR5 до 85% при выживаемости клеток от 30,4 до 46,2%. Эффективность трансфекции донорской матрицы в виде двуцепочечной линейной молекулы ДНК составляла 7,1-23,6%. Согласно данным проточной цитофлуориметрии эффективность вставки трансгена к шестому дню после трансфекции составляла 6,9-13,2% в зависимости от типа модификации концов донорской матрицы и была максимальной для донорской матрицы без модификаций. В сравнении с полученными ранее предварительными данным и контрольными образцами в текущем эксперименте с использованием в качестве донорской матрицы плазмидной ДНК эффективность вставки трансгена была выше при использовании линейных ДНК-матриц – 2,6% vs. 13,2%.
Выводы
Разработка линейных двуцепочечных ДНК матриц в качестве доноров для репарации целевых разрывов в ДНК имеет перспективу для разработки геннотерапевтических клеточных продуктов для лечения моногенных заболеваний человека.
Авторы благодарят за финансовую поддержку Российский Фонд Фундаментальных Исследований, грант №19-29-04025мк.
Ключевые слова
Генная терапия, невирусная, редактирование генов, платформа ТALEN, ген CCR5.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29338
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29339
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29340
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29341
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the <i>CCR5</i> locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*10<sup>6</sup> cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.</p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target <i>CCR5</i> gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.</p>
<h3>Conclusion</h3>
<p style="text-align: justify;">The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.</p>
<p style="text-align: justify;"><i>The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk. </i></p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, <i>CCR5</i> gene.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.
Materials and methods
Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the CCR5 locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*106 cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.
Results
A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target CCR5 gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.
Conclusion
The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.
The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, CCR5 gene.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29342
[VALUE] => GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-05. Improving the efficiency of long targeted insertions into the human cell genome using the TALEN editing platform and non-viral delivery techniques for gene therapy of socially significant diseases
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29343
[VALUE] => 3028
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3028
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29344
[VALUE] => 3029
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3029
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Alena I. Shakirova, Timofei E. Karpov, Yaroslava V. Komarova, Olga S. Epifanovskaya, Vladislav S. Sergeev, Marina O. Popova, Kirill V. Lepik, Alexander D. Kulagin
RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Kirill V. Lepik, e-mail: lepikkv@gmail.com
Gene therapy based on transplantation of genetically modified hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) using engineered nucleases (ZFN, TALEN, CRISPR/Cas9) has a strong potential for the treatment of a number of human monogenic diseases. The basis of this treatment method is the insertion of a healthy copy of a DNA segment or an entire transgene into the locus of a double-strand break formed by a nuclease, delivered as a donor template in various forms. It is known that an important factor affecting the insertion efficiency is the structure and length of the donor DNA template introduced into the cell. Among various forms (single- or double-stranded DNA, circular or linear, viral or non-viral, etc.), linear double-stranded linear DNA is of interest for preclinical development of gene therapy cell products due to potential efficiency and robust production. The limiting factor in their use is toxicity to primary human cells, which depends on the structural parameters of the templates [Paludan et al., 2013; Kath et al., 2022]. The aim of this work is to optimize the structure of the donor template introduced into the cell in the form of a linear double-stranded DNA used for homologous repair of TALEN-mediated targeted DNA breaks in order to increase the efficiency of editing/inserting therapeutic transgenes in human cell lines, which are the closest models of HSPC.
Materials and methods
Synthesis of variants of donor linear DNA templates was performed by PCR from plasmid DNA encoding the GFP transgene and homology domains to the CCR5 locus at the site of the formation of a 400 bp long double-stranded break. Transfection of K562 cells was carried out at a concentration of 3.3*106 cells/mL according to a previously developed two-stage electroporation protocol using a Gene Pulser Xcell System electroporator (Bio-Rad, USA). The mRNA concentration during transfection was 25 µg/mL. The concentration of donor templates was 20 μg/mL. The following modifications of donor templates were studied: the addition of a sequence that inhibits sensors of intracellular immune response to exogenous DNA or damage to genomic DNA (TLR9/AIM2/cGAS) – A151 to the sequence of the donor template, as well as stabilization of the ends of the donor template with phosphorothioate bonds. The efficiency of transgene insertion and cell viability were assessed by flow cytometry.
Results
A two-stage transfection protocol was developed, which provides up to 85% knockout efficiency of the target CCR5 gene with cell survival from 30.4 to 46.2%. The transfection efficiency of the donor template in the form of a double-stranded linear DNA molecule was 7.1-23.6%. According to flow cytometry data, the efficiency of transgene insertion by the sixth day after transfection was 6.9-13.2%, depending on the type of modification of the ends of the donor template, and was maximal for the donor template without modifications. In comparison with the previously obtained preliminary data and control samples in the current experiment using plasmid DNA as a donor template, the efficiency of transgene insertion was higher when using linear DNA templates – 2.6% vs. 13.2%.
Conclusion
The development of linear double-stranded DNA templates as donors for the repair of precised DNA breaks holds promise for the development of gene therapy cell products for the treatment of monogenic human diseases.
The authors are grateful for financial support from the Russian Foundation for Basic Research, grant No. 19-29-04025mk.
Keywords
Gene therapy, nonviral, gene editing, TALEN platform, CCR5 gene.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29325
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Алиса С. Постовалова<sup>1,2</sup>, Тимофей Е. Карпов<sup>1,2</sup>, Николай А. Костеников<sup>2</sup>, Дмитрий С. Сысоев<sup>2</sup>,
Дмитрий О. Антуганов<sup>2</sup>, Дарья Р. Ахметова<sup>1,2</sup>, Альберт Р. Муслимов<sup>1</sup>, Александр С. Тимин<sup>1,2</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Алиса С. Постовалова1,2, Тимофей Е. Карпов1,2, Николай А. Костеников2, Дмитрий С. Сысоев2,
Дмитрий О. Антуганов2, Дарья Р. Ахметова1,2, Альберт Р. Муслимов1, Александр С. Тимин1,2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29326
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия<br> <sup>2</sup> Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, Россия
2 Российский научный центр радиологии и хирургических технологий им. A. M. Гранова, Санкт-Петербург, Россия
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29327
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">Был разработан препарат <sup>188</sup>Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных <sup>188</sup>Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.</p>
<h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.</p>
<h3>Выводы</h3>
<p style="text-align: justify;">Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.</p>
<h3>Ключевые слова</h3>
<p style="text-align: justify;">Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Артриты – это гетерогенная группа заболеваний, поражающих один или несколько суставов, имеющих в основе воспалительное повреждение различного генеза с вовлечением синовиальной оболочки, капсулы, хряща и других элементов сустава. Воспалительные заболевания суставов поражают 0,3-3% населения во всем мире, в частности – 21% взрослого населения России. Отмечается, что отек сустава, скованность движений и хронические боли являются симптомами артритов, ухудшающими нормальную трудоспособность и часто приводящие к инвалидности. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения артритов является актуальной в связи с многообразием клинических форм воспалительных поражений суставов и частой неэффективностью базисной, биологической и глюкокортикостероидной терапии. Радиофармпрепараты обладают рядом преимуществ перед лучевой терапией и химиотерапией в лечении воспалительных заболеваний суставов. Таким образом, цель исследования заключалась в разработке радиофармпрепарата комплексного состава и исследовании его терапевтического эффекта на животных с моделью артрита.
Материалы и методы
Был разработан препарат 188Re-ПЛА-МЧ, в виде полимерных носителей, меченных 188Re. Произведена характеризация носителей, оценка токсического воздействия и безопасности использования препарата, в т.ч. – его биораспределение. Результат стабильности препарата и его удержание в месте введения фиксировали по ОФЕКТ и ПЭТ-КТ изображениям, сделанным в 1, 2, 3 и 7 день исследования, а также по результатам прямой радиометрии с измерением радиоактивного сигнала (%ID/г). Исследована терапевтическая эффективность радиофармпрепарата на модели воспалительных заболеваний крупных суставов крыс линии Wistar посредством замеров изменения диаметра суставов и гистологического анализа. Данные об экспрессии провоспалительных цитокинов, полученные в ходе экспериментов, согласуются с гистологическими наблюдениями.
Результаты
В экспериментах по биораспределению установлено, что 98% радиоактивного препарата остается в месте введения, не поражая здоровые ткани организма. С помощью сделанных замеров суставов, анализа воспалительных цитокинов крови и гистологического анализа показана эффективность препарата в лечении воспалительных заболеваний суставов.
Выводы
Согласно результатам исследования, разработанный радиофармпрепарат показал свою эффективность в лечении модели воспалительных заболеваний суставов на крысах линии Wistar. Это дает основания для проведения дальнейших работ в этом направлении.
Ключевые слова
Артрит, синовэктомия, микроносители, радионуклидная терапия, рений.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29328
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29329
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Alisa S. Postovalova<sup>1,2</sup>, Timofey E. Karpov<sup>1,2</sup>, Nikolay A. Kostenikov<sup>2</sup>, Dmitry S. Sysoev<sup>2</sup>, Dmitry O. Antuganov<sup>2</sup>,
Darya R. Akhmetova<sup>1,2</sup>, Albert R. Muslimov<sup>1</sup>, Alexander S. Timin<sup>1,2</sup>
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2,
Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29330
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia<br> <sup>2</sup> A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29331
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">The <sup>188</sup>Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of <sup>188</sup>Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1<sup>st</sup>, 2<sup>nd</sup>, 3<sup>rd</sup> and 7<sup>th</sup> day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data. </p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.</p>
<h3>Conclusion</h3>
<p style="text-align: justify;">According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.</p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.
Materials and methods
The 188Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of 188Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1st, 2nd, 3rd and 7th day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data.
Results
The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.
Conclusion
According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.
Keywords
Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29332
[VALUE] => GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-04. Studies on therapeutic potential of a radiopharmaceutical based on polymer capsules with incorporated 188Re isotope for the treatment of inflammatory joint diseases
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29333
[VALUE] => 3026
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3026
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29334
[VALUE] => 3027
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3027
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Alisa S. Postovalova1,2, Timofey E. Karpov1,2, Nikolay A. Kostenikov2, Dmitry S. Sysoev2, Dmitry O. Antuganov2, Darya R. Akhmetova1,2, Albert R. Muslimov1, Alexander S. Timin1,2
1 Peter The Great St. Petersburg Polytechnic University, St. Petersburg, Russia
2 A. M. Granov Russian Research Center of Radiology and Surgical Technologies, St. Petersburg, Russia
Contact: Dr. Alisa S. Postovalova, phone: +7 (922) 155-83-02, e-mail: alisa_postovalova@mail.ru
Arthritis is a heterogeneous group of diseases that affect one or more joints and are caused by inflammatory damage of various genesis, by involving the synovial membrane, capsule, cartilage and other components of the joint. Inflammatory diseases of the joints (IDJ) occur in 0.3-3% of the population worldwide. In particular, they affect 21% of adults in Russia. The joint swelling, stiffness of movements and chronic pain are observed in arthritis, thus altering normal working capacity, and often leading to disability. Development of novel drugs for the treatment of arthritis is an urgent task, due to variety of the IJD lesions and common inefficiency of basic, biological and glucocorticosteroid therapy. Radiopharmaceuticals show a number of advantages over radiation and chemotherapy used in the IDJ treatment. Hence, the aim of the study was to develop a radiopharmaceutical of a complex composition and evaluate its therapeutic effect in the animal model of arthritis.
Materials and methods
The 188Re-PLA-MPs preparation was developed in the form of 188Re-labeled polymer carriers. Basic properties of the carriers, their toxicity and safety were assessed, as well as the drug biodistribution. The results of the drug stability testing and its retention at the injection site were registered by SPECT and PET-CT images taken on the 1st, 2nd, 3rd and 7th day of the study, as well as by direct radiometry with measurement of the radioactive signal (%ID/g). Therapeutic efficacy of the radiopharmaceutical was evaluated in a model of inflammatory disease of large joints in the Wistar rats by measuring changes in the joint diameter and histology examination. The data on expression of proinflammatory cytokines were found to be consistent with histological data.
Results
The biodistribution experiments have shown that 98% of the radioactive drug remained at the injection site, without penetrating healthy tissues. Biological effects of the drug in the IDJ treatment was shown by means of the joint sizing, measurements of inflammatory blood cytokines and histological analysis.
Conclusion
According to experimental results, the developed radiopharmaceutical has shown its efficiency in the animal model of inflammatory joint disease produced in Wistar rats, thus providing a basis for further studies in this area.
Keywords
Arthritis, synovectomy, microcarriers, radionuclide therapy, rhenium.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29305
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Александр А. Мигас<sup>1</sup>, Татьяна В. Шман<sup>1</sup>, Анна В. Клыч<sup>1</sup>, Елена С. Лукойко<sup>1</sup>, Евгений В. Дмитриев<sup>1</sup>,
Людмила В. Мовчан<sup>1</sup>, Николай А. Катин<sup>3</sup>, Инна В. Пролесковская<sup>1</sup>, Ольга В. Алейникова<sup>2</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Анна В. Клыч1, Елена С. Лукойко1, Евгений В. Дмитриев1,
Людмила В. Мовчан1, Николай А. Катин3, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29306
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия<br> <sup>3</sup> Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
3 Витебский областной клинический онкологический диспансер, Витебск, Республика Беларусь
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29307
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">
Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии.
</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">
Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки <i>MLL</i> (<i>KMT2A</i>) гена (<i>MLL-AF9</i>), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли <i>MLL-AF9</i> перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×10<sup>6</sup> клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания.
</p>
<h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">
Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте <i>in vitro</i>, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56).
</p>
<h3>Вывод</h3>
<p style="text-align: justify;">
Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена <i>MLL</i>, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58.
</p>
<h3>Ключевые слова</h3>
<p style="text-align: justify;">
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58.
</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
Первичная резистентность к CAR T-клеточной терапии у детей с В-линейным острым лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ) наблюдается с частотой до 20% случаев [Atilla PA, 2022]. Причиной данного явления может быть, как сниженная функциональная активность CAR-Т-клеток, так и биологические особенности опухолевого клона. В Центре детской онкологии, гематологии и иммунологии (РНПЦДОГИ) анти-CD19 CAR T-терапия была проведена для 8 пациентов с В-ОЛЛ, у одного из которых наблюдали резистентность к данной терапии.
Материалы и методы
Мальчик в возрасте 7 лет поступил в РНПЦДОГИ, где был установлен диагноз В-ОЛЛ с наличием перестройки MLL (KMT2A) гена (MLL-AF9), BIII иммунофенотип с положительной экспрессией NG2, CD33, CD65 и СD15. После проведения терапии согласно протоколу ALL-MB-2015 была достигнута непродолжительная ремиссия, за которой последовал ранний I изолированный (КМ) рецидив. При рецидиве опухолевые клетки сохраняли MLL-AF9 перестройку, но соответствовали BI иммунофенотипу с экспрессией CD33 и СD15. После курса противорецидивной терапии пациент не достиг ремиссии, развил химиорезистентность, вследствие чего было принято решение о проведении анти-CD19 CAR-Т-терапии. Учитывая высокую опухолевую нагрузку (93% бластных клеток в костном мозге) и общее состояние пациента, CAR Т-клетки вводили дробно в количестве 10% и 90% от расчетной дозы (1×106 клеток/кг) с интервалом 7 суток. Иммуномониторинг не выявил значимой экспансии CAR-T-клеток в организме реципиента. Пиковое содержание CAR T-клеток в периферической крови составило 0,05 клеток/мкл, тогда как значение медианы пикового уровня CAR T-клеток для остальных 7 пациентов составило 17 (1,7-224) клеток/мкл. Несмотря на проведенную иммунотерапию наблюдали рост содержания бластных клеток в костном мозге и периферической крови. При иммунофенотипировании на стадии прогрессии был выявлен смешанный фенотип (В/My) лейкемических клеток. Спустя 30 суток после последнего введения CAR Т-клеток пациент умер от прогрессирования основного заболевания.
Результаты
Известно, что особенности CAR Т-клеточного продукта влияют на эффективность терапии. Так, высокое содержание терминально дифференцированных, истощенных Т-клеток в конечном продукте снижает их способность к экспансии/персистенции. В клеточном продукте, полученном для описываемого пациента, содержание CCR7-позитивных клеток составило 84% и 90% для CD4 и CD8 CAR T-клеток соответственно. Также была подтверждена высокая цитотоксическая активность CAR Т-клеток пациента в тесте in vitro, как в отношении модельной клеточной линии, так и собственных опухолевых клеток реципиента. Согласно литературным данным смешанный фенотип лейкемических клеток (CD19, CD20, CD33, CD34), наблюдаемый и в описываемом случае, с высокой частотой встречается среди пациентов, не отвечающих на CAR T-терапию [KE Masih, 2022]. Еще одним из описанных ранее механизмов первичной резистентности является возникновение мутаций в гене, кодирующем белок CD58, либо снижение его экспрессии на поверхности опухолевых клеток [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 является лигандом для костимуляторной молекулы CD2, и нарушение их взаимодействия приводит к формированию неэффективного иммунологического синапса между CAR Т-лимфоцитом и опухолевой клеткой из-за чего снижается функциональная активность CAR Т-клеток и их способность к экспансии. Нормализованный относительно здоровых лимфоцитов коэффициент экспрессии CD58 на поверхности опухолевых клеток пациента составил 0,95. При этом, медианное значение для аналогичного показателя в группе пациентов с эффективной экспансией CAR T-клеток составило 2,46 (1,2-6,56).
Вывод
Таким образом, описанный случай резистентности В-ОЛЛ к анти-CD19 CAR T-терапии можно объяснить выявленными особенностями лейкемических клеток пациента: смешанный иммунофенотип (B/My), наличие перестройки с участием гена MLL, сниженный уровень (отсутствие) экспрессии СD58.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, первичная резистентность, CD58.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29308
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29309
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Anna V. Klych<sup>1</sup>, Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Evgeniy V. Dmitriev<sup>1</sup>, Lyudmila V. Movchan<sup>1</sup>, Mikalai A. Katsin<sup>3</sup>, Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>2</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29310
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia<br> <sup>3</sup> Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com </p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
3 Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29311
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">
Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for <i>MLL</i> (<i>KMT2A</i>) gene rearrangement (<i>MLL-AF9</i>), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for <i>MLL-AF9</i>, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×10<sup>6</sup> cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
</p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence <i>in vivo</i>. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high <i>in vitro</i> cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
</p>
<h3>Conclusions</h3>
<p style="text-align: justify;">
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of <i>MLL</i> gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
</p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
</p>
<br>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
Materials and methods
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for MLL (KMT2A) gene rearrangement (MLL-AF9), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for MLL-AF9, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×106 cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
Results
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence in vivo. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high in vitro cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
Conclusions
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of MLL gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
Keywords
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29312
[VALUE] => GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-02. Resistance to anti-CD19 CAR T-cell therapy. Case report
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29313
[VALUE] => 3022
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3022
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29314
[VALUE] => 3023
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3023
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Anna V. Klych1, Elena S. Lukojko1, Evgeniy V. Dmitriev1, Lyudmila V. Movchan1, Mikalai A. Katsin3, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova2
1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
3 Vitebsk Regional Center of Clinical Oncology, Vitebsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Alexandr A. Migas, e-mail: alexandr.migas@gmail.com
Primary resistance to CAR T-cell therapy occurs in 10-20% of pediatric B-ALL cases [PA Atilla, 2022]. Impaired functional activity of CAR T-cells and biological properties of leukemic cells are among the causes of described phenomenon. Anti-CD19 CAR T-cell therapy was carried out at Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology (BRCPOHI) for 8 B-ALL patients with one case proven to have primary resistance to the given therapy.
Materials and methods
A 7-year old boy was diagnosed with B-ALL, positive for MLL (KMT2A) gene rearrangement (MLL-AF9), BIII immunophenotype positive for NG2, CD33, CD65 and CD15 expression. Short-term remission was achieved after treatment according to ALL-MB-2015 protocol with subsequent isolated bone marrow (BM) early relapse I. Leukemic cells were still positive for MLL-AF9, but immunophenotype changed to BI with CD33 and CD15 expression. Anti-relapse treatment failed to induce remission. Moreover, leukemic clone acquired multi-drug resistance to chemotherapy. The decision was made to perform anti-CD19 CAR T-cell therapy. Taking into account high tumor burden (93% of blast cells in BM) and patient general condition, final dose of CAR-T-cells (1×106 cells/kg) was given as fractionated infusions of 10% and 90% over 7 days. Immune monitoring did not reveal significant CAR T-cell expansion in recipient BM or peripheral blood (PB). Peak concentration of CAR T-cells in patient PB was 0.05 cells/μl, while median value in group of 7 patients with noticed expansion was 17 cells/μl [range 1.7-224]. Despite carried out immunotherapy, growth of leukemic blasts’ count was observed in PB and BM. Immunophenotyping of leukemic cells at this stage revealed mixed phenotype (B/My). Patient died of the disease progression 30 days after the last injection of CAR-T-cells.
Results
It is well known that efficiency of CAR T-cell therapy depends dramatically on cell product characteristics. High content of exhausted and terminally differentiated T-cells significantly reduce their potential for expansion and persistence in vivo. In described case number of CCR7-positive CD4 and CD8 T-cells in final product was 84% and 90% correspondingly. Moreover, CAR-T-cells demonstrated high in vitro cytotoxicity against model cell line and recipient leukemic blasts. It was previously reported that multi-lineage phenotype (CD19, CD20, CD33, CD34) is frequent in CAR T-cell therapy non-responders [KE Masih, 2022]. It must be noticed, that B/My phenotype was also observed in described patient. Another one mechanism of primary resistance to CAR-T-cell therapy is CD58 gene mutations or loss of corresponding protein expression on tumor cells [RG Majzner, 2020, Xin Yan, 2022]. CD58 protein is a ligand for T-cell costimulatory receptor CD2. Disruption of CD58 interaction with its partner CD2 leads to formation of suboptimal immunological synapse, which results in impairment of CAR T-cell functional activity and loss of its expansion potential. Normalized to healthy lymphocytes, coefficient of CD58 expression on the surface of given patient blasts was 0.95. Whereas median value for the same parameter in group of CAR T-therapy responders was 2.46 (range 1.2-6.56).
Conclusions
We suppose that the described case of primary resistance of B-ALL to anti-CD19 CAR T-cell therapy can be explained by patient’s leukemic cells properties: mixed immunophenotype and rearrangement of MLL gene, decreased expression/loss of surface CD58 antigen.
Keywords
Total body irradiation, allo-HSCT, children, hemoblastoses, radiation therapy.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29315
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Анастасия С. Мухаметшина, Александр А. Мигас, Татьяна В. Шман
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29316
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29317
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.</p>
<h3>Результаты и обсуждение</h3>
<p style="text-align: justify;">Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.</p>
<h3>Выводы</h3>
<p style="text-align: justify;">Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.</p>
<h2>Ключевые слова</h2>
<p style="text-align: justify;">ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Активное применение генно-модифицированных естественных киллерных (ЕК) клеток ограничено методологическими сложностями доставки генетического материала в эти клетки. Одним из используемых способов модификации является лентивирусная трансдукция. Однако, ее использование ограничено выходом трансдуцированных клеток. Вирус, полученный на основе векторной кассеты VSV-G, классически используемый для создания химерных антигенных рецепторов CAR-T-клеток, не эффективно трансдуцирует ЕК-клетки. Чтобы повысить эффективность трансдукции ЕК-клеток, мы исследовали альтернативные псевдотипированные белки. Большую эффективность трансдукции показывает псевдотипированный лентивирусный вектор оболочки бабуина BaEV-TR. Он связывает входные рецепторы натрий-зависимого переносчика нейтральных аминокислот ASCT-1 и ASCT-2 и широко экспрессируется в гемопоэтических линиях. Таким образом, использование альтернативных псевдотипов лентивирусов позволит решить множество фундаментальных вопросов и выявить способы получения достаточного количества генетически модифицированных EK-клеток. Целью работы было сравнение эффективности трансдукции ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G.
Материалы и методы
В работе использовали мононуклеарные клетки периферической крови двух здоровых доноров. Первичная культура ЕК-клеток была получена с использованием набора CD3-деплеции, после чего клетки культивировались в полной ростовой среде PRMI-1640 с добавлением ИЛ-2 500 ЕД, 72 часа перед трансдукцией; также были использованы два лентивирусных вектора отличных между собой плазмидой оболочки, в первом варианте использовалась pMD2.G, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везикулярного стоматита VSV-G, во втором BaEV-TR, кодирующая модифицированный гликопротеин оболочки ретровируса бабуина. Плазмиды psPAX2, содержащая гены gag-pol и pUltra, кодирующая ген репортерного белка EGFP, входили в состав обоих вариантов. В культуральный планшет сажали ЕК-клетки в концентрации 2*10^5 кл/мл с ИЛ-2 200 ЕД и 10 мкг вектофузина в 0,5 мл среды. Вирусные частицы добавляли к клеткам в количестве, необходимом для достижения множественности инфекции 1, 5, 10. Далее проводили центрифугирование при 800 g, 90 минут, 37°C. После трансдукции вируса клетки инкубировали при 37°С, а смену среды проводили спустя 24 часа. Уровень трансдукции определяли методом проточной цитометрии по экспрессии репортерного белка EGFP через 72 часа.
Результаты и обсуждение
Мы сравнили эффективность трансдукции первичных ЕК-клеток двумя вариантами лентивирусных частиц на основе векторных кассет BaEV-TR и VSV-G. Проценты трансдуцированных клеток для множественности инфекции 1, 5, 10 при использовании VSV-G и BaEV-TR составили 0,28%, 1,5%, 2,8% и 50%, 62%, 70%, соответственно. Рецептор для VSV-G представляет собой липидный рецептор низкой плотности LDL-R, который практически не экспрессируется ни в покоящихся, ни в активированных ЕК-клетках [Bari et al., 2019], что объясняет низкий процент трансдукции, полученный нами. При этом рецепторы оболочки бабуина – ASCT-1 и ASCT-2 усиленно экспрессируются в ответ на активацию ЕК-клеток ИЛ-2, ИЛ-12 и ИЛ-21, что приводит к возрастанию эффективности трансдукции BaEV-TR [1] и получило подтверждение в наших результатах.
Выводы
Процент трансдуцированных ЕК-клеток лентивирусным вектором на основе кассеты BaEV-TR выше, чем на основе векторной кассеты VSV-G, что может быть в дальнейшем использовано для целей иммунотерапии на основе модифицированных ЕК-клеток.
Ключевые слова
ЕК-клетки, трансдукция, лентивирус, псевдотипированные частицы оболочки, ретровирус, бабуин.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29318
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29319
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29320
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29321
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.</p>
<h3>Results and discussion</h3>
<p style="text-align: justify;">We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.</p>
<h3>Conclusions</h3>
<p style="text-align: justify;">The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.</p>
<h3>Reference</h3>
<p style="text-align: justify;">Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001</p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.
Materials and methods
We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.
Results and discussion
We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.
Conclusions
The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.
Reference
Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001
Keywords
NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29322
[VALUE] => GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-03. Lentiviral transduction efficiency of natural killer cells
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29323
[VALUE] => 3024
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3024
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29324
[VALUE] => 3025
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3025
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Anastasia S. Mukhametshyna, Alexander A. Migas, Tatsiana V. Shman
Republican Research and Practical Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
Contact: Dr. Anastasia S. Mukhametshyna, phone: +375 (291) 752-676, e-mail: mukhametshyna_n@yahoo.com
The active use of genetically modified natural killer (NK)-cells is limited by methodological difficulties of delivering genetic material to these cells. Lentiviral transduction is one of the cell modification methods. However, its use is limited by low yield of transduced cells. The virus derived from the VSV-G vector cassette, typically used to produce CAR-T cells, doesn’t efficiently transduce NK-cells. To increase the efficiency of NK-cell transduction, we studied alternative pseudotyped proteins. The pseudotyped lentiviral baboon envelope vector BaEV-TR shows higher transduction efficiency. It binds the entry receptors of the sodium-dependent neutral amino acid transporter ASCT-1 and ASCT-2 and is widely expressed in hematopoietic lineages. Thus, the use of alternative pseudotypes of lentiviruses will provide solution of many fundamental issues and specify the tools of obtaining sufficient numbers of genetically modified NK cells. Our objective was to compare the efficiency of NK-cell transduction using two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes.
Materials and methods
We used peripheral blood mononuclear cells from two healthy donors. A primary culture of NK-cells was obtained using a CD3-depletion kit, after which the cells were cultured in PRMI-1640 complete growth medium supplemented with IL-2 500 IU, 72 hours before transduction; two lentiviral vectors with different envelope plasmids were also used; in the first variant, pMD2.G was used, encoding the surface glycoprotein G of the vesicular stomatitis virus (VSV-G); in the second, BaEV-TR, encoding the modified envelope glycoprotein of the baboon retrovirus. The psPAX2 plasmids, containing gag-pol and pUltra genes which encode the EGFP reporter protein gene, were included in both variants. NK cells were grown in complete RPMI medium prior to transduction. The multiplicity of infection was of 1, 5, 10. After transduction of the virus, the cells were incubated at 37°C, and the medium was changed after 24 hours. The level of transduction was determined by flow cytometry by the expression of the EGFP reporter protein after 72 hours.
Results and discussion
We compared the transduction efficiency of primary NK cells with two variants of lentiviral particles based on the BaEV-TR and VSV-G vector cassettes. The percentages of transduced cells at the infection multiplicity of 1, 5, 10 with VSV-G and BaEV-TR were 0.28%, 1.5%, 2.8% and 50%, 62%, 70%, respectively. The VSV-G receptor is a low-density lipid receptor LDL-R which is not expressed in either resting or activated NK-cells [1] thus explaining the low transduction rate we obtained. However, the baboon envelope receptors (ASCT-1 and ASCT-2) are overexpressed in response to activation of NK-cells by IL-2, IL-12 and IL-21, thus leading to increased efficiency of BaEV-TR transduction [Bari et al., 2019] as confirmed by our results.
Conclusions
The percentage of NK cells transduced with a lentiviral vector employing BaEV-TR vector cassette is higher than with a VSV-G-based vector cassette, which may be further used for immunotherapy with modified NK cells.
Reference
Bari R [et al.] (2019) A distinct subset of highly proliferative and lentiviral vector (LV)-transducible NK-cells define a readily engineered subset for adoptive cellular therapy. Front. Immunol. 10:2001. doi:10.3389/fimmu.2019.02001
Keywords
NK cells, transduction, lentivirus, pseudotyped envelope particles, retrovirus, baboon.
Gene and cellular therapy: GC-01 – GC-07
Array
(
[KEYWORDS] => Array
(
[ID] => 19
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:46:01
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Ключевые слова
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => KEYWORDS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 19
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 4
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => Y
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => Y
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Ключевые слова
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[SUBMITTED] => Array
(
[ID] => 20
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата подачи
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUBMITTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 20
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата подачи
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[ACCEPTED] => Array
(
[ID] => 21
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата принятия
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ACCEPTED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 21
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата принятия
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PUBLISHED] => Array
(
[ID] => 22
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 17:21:42
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Дата публикации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PUBLISHED
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 22
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => DateTime
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Дата публикации
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[CONTACT] => Array
(
[ID] => 23
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 14:43:05
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Контакт
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => CONTACT
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 23
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Контакт
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHORS] => Array
(
[ID] => 24
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:45:07
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHORS
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => E
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => Y
[XML_ID] => 24
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 3
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => EAutocomplete
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[VIEW] => E
[SHOW_ADD] => Y
[MAX_WIDTH] => 0
[MIN_HEIGHT] => 24
[MAX_HEIGHT] => 1000
[BAN_SYM] => ,;
[REP_SYM] =>
[OTHER_REP_SYM] =>
[IBLOCK_MESS] => N
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_RU] => Array
(
[ID] => 25
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Авторы
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 25
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29295
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Елена С. Лукойко<sup>1</sup>, Александр А. Мигас<sup>1</sup>, Татьяна В. Шман<sup>1</sup>, Игорь Н. Северин<sup>2</sup>, Ольга А. Каленик<sup>2</sup>,
Наталья Н. Конопля<sup>2</sup>, Инна В. Пролесковская<sup>1</sup>, Ольга В. Алейникова<sup>3</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Елена С. Лукойко1, Александр А. Мигас1, Татьяна В. Шман1, Игорь Н. Северин2, Ольга А. Каленик2,
Наталья Н. Конопля2, Инна В. Пролесковская1, Ольга В. Алейникова3
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Авторы
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_RU] => Array
(
[ID] => 26
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Организации
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 26
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29296
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>2</sup> Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь<br> <sup>3</sup> Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова, Минск, Республика Беларусь
3 Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева, Москва, Россия
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Организации
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_RU] => Array
(
[ID] => 27
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:01:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Описание/Резюме
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 27
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29297
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.</p>
<h3>Материалы и методы</h3>
<p style="text-align: justify;">Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток <i>ex vivo</i> составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×10<sup>6</sup> CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.</p>
<h3>Результаты</h3>
<p style="text-align: justify;">В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента. </p>
<p style="text-align: justify;">Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).</p>
<h3>Вывод</h3>
<p style="text-align: justify;">Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.</p>
<h2>Ключевые слова</h2>
<p style="text-align: justify;">CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Технология CAR Т-клеточной терапии (от англ. Chimeric Antigen Receptor T-cell therapy) с 2020 года активно внедряется в клиническую практику в профильных учреждениях Министерства здравоохранения республики Беларусь в рамках пилотного клинического исследования NCT05333302. Целью данного исследовательского протокола является оценка безопасности и эффективности применения локально произведенного CAR Т-клеточного продукта для пациентов с CD19-позитивными рецидивирующими или рефрактерными острыми лимфобластными лейкозами/лимфомами.
Материалы и методы
Производство и клиническое применение CAR Т-клеточного продукта осуществляли на базе ГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии» и ГУ «РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н. Н. Александрова». В качестве исходного материала использовали продукт афереза пациентов. Селекцию популяций CD4 и CD8 Т-клеток осуществляли раздельно иммуномагнитным методом. Генетическую модификацию Т-клеток производили с использованием лентивирусного вектора, кодирующего бицистронную экспрессионную кассету FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt с конструкцией CAR к белку CD19 человека и транкированный вариант рецептора эпидермального ростового фактора человека. Продолжительность экспансии CAR Т-клеток ex vivo составляла 12-14 суток. Контроль качества конечного клеточного продукта включал оценку микробиологической безопасности, субпопуляционного состава, а также его функциональной активности. Введение клеточного продукта в дозе 1-3×106 CAR T-клеток /кг веса реципиента, в зависимости от опухолевой массы, осуществляли после проведения лимфодеплеции (флударабин + циклофосфамид). Профилактику и лечение синдрома высвобождения цитокинов CRS (от англ. Cytokine Release Syndrome) и неврологических токсических эффектов проводили с применением тоцилизумаба и кортикостероидов.
Результаты
В рамках текущего исследования проведена CAR T-терапия для 13 пациентов. Экспансию CAR-T-клеток наблюдали у 12 пациентов. Медиана пикового значения экспансии CAR T-клеток в периферической крови составила 17 клеток/мкл (1,7-224). Медиана длительности персистенции CAR T-клеток составила 60 суток (13-90). У всех реципиентов с отмеченной экспансией CAR T-клеток наблюдалась В-клеточная аплазия. Реакцию CRS наблюдали у 77% реципиентов: степень 1 – у 7 пациентов, степень 2 – в 1 случае, степень 3 – у 2 пациентов. Нейротоксичность наблюдали у 46% реципиентов: 1-й степени – у 5 пациентов, 3-ей степени – у 1 пациента.
Полный ответ был зафиксирован для 6 из 8 пациентов с В-линейным ОЛЛ. Один пациент не ответил на проводимую CAR T-терапию и впоследствии умер от прогрессирования, один пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. У 3 из 6 вышедших в ремиссию пациентов был зафиксирован рецидив спустя 4, 5 и 18 месяцев после проведения CAR T-терапии, соответственно. Медиана продолжительности ремиссии в данной группе составила 9 месяцев (4-18). В группе из 5 пациентов с В-клеточными лимфомами полный ответ был зафиксирован для 3, частичный – для 1 пациента, и 1 пациент умер от осложнений (CRS + сепсис) до достижения клинического ответа. Пациенты с полным ответом находятся в ремиссии 1, 6 и 10 месяцев соответственно. Пациент с частичным ответом готовится к аутологичной трансплантации гемопоэтической стволовой клетки. Общий исход: в живых – 9 пациентов, умерло – 4, медиана продолжительности наблюдения составила 6 мес. (1-20).
Вывод
Данный метод воспроизводим в клинических условиях и, по результатам текущих наблюдений, обладает достаточной эффективностью в лечении ОЛЛ.
Ключевые слова
CAR Т-клеточная терапия, В-ОЛЛ, В-клеточная лимфома.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Описание/Резюме
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[DOI] => Array
(
[ID] => 28
[TIMESTAMP_X] => 2016-04-06 14:11:12
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => DOI
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => DOI
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 28
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29298
[VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 10.18620/ctt-1866-8836-2022-11-3-1-132
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => DOI
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[AUTHOR_EN] => Array
(
[ID] => 37
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Author
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => AUTHOR_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 37
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29299
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p>Elena S. Lukojko<sup>1</sup>, Alexandr A. Migas<sup>1</sup>, Tatsiana V. Shman<sup>1</sup>, Igor N. Severin<sup>2</sup>, Olga A. Kalenik<sup>2</sup>, Natalya N. Konoplia<sup>2</sup>,
Inna V. Proleskovskaya<sup>1</sup>, Olga V. Aleinikova<sup>3</sup></p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2,
Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Author
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[ORGANIZATION_EN] => Array
(
[ID] => 38
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Organization
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => ORGANIZATION_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 38
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29300
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p><sup>1</sup> Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>2</sup> N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus<br> <sup>3</sup> Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia</p><br>
<p><b>Contact:</b> Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com </p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => 1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus
3 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
Contact: Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Organization
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[SUMMARY_EN] => Array
(
[ID] => 39
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-02 18:02:59
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Description / Summary
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => SUMMARY_EN
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 39
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29301
[VALUE] => Array
(
[TEXT] => <p style="text-align: justify;">Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.</p>
<h3>Materials and methods</h3>
<p style="text-align: justify;">Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After <i>ex vivo</i> cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×10<sup>6</sup> cells <i>per</i> kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.</p>
<h3>Results</h3>
<p style="text-align: justify;">CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion <i>in vivo</i> observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20). </p>
<h3>Conclusion</h3>
<p style="text-align: justify;">The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.</p>
<h2>Keywords</h2>
<p style="text-align: justify;">CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.</p>
[TYPE] => HTML
)
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => Array
(
[TEXT] => Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.
Materials and methods
Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After ex vivo cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×106 cells per kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.
Results
CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion in vivo observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20).
Conclusion
The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.
Keywords
CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.
[TYPE] => HTML
)
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Description / Summary
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[NAME_EN] => Array
(
[ID] => 40
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-03 10:49:47
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Name
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 80
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 40
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => Y
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29302
[VALUE] => GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => GC-01. Anti-CD19 CAR T-cell therapy in Belarus: Current state
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Name
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[FULL_TEXT_RU] => Array
(
[ID] => 42
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-07 20:29:18
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Полный текст
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => FULL_TEXT_RU
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 42
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 200
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Полный текст
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TEXT] =>
[TYPE] => HTML
)
)
[PDF_RU] => Array
(
[ID] => 43
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF RUS
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_RU
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 43
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29303
[VALUE] => 3020
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3020
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF RUS
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[PDF_EN] => Array
(
[ID] => 44
[TIMESTAMP_X] => 2015-09-09 16:05:20
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => PDF ENG
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => PDF_EN
[DEFAULT_VALUE] =>
[PROPERTY_TYPE] => F
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 44
[FILE_TYPE] => doc, txt, rtf, pdf
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] =>
[USER_TYPE_SETTINGS] =>
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] => 29304
[VALUE] => 3021
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] => 3021
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => PDF ENG
[~DEFAULT_VALUE] =>
)
[NAME_LONG] => Array
(
[ID] => 45
[TIMESTAMP_X] => 2023-04-13 00:55:00
[IBLOCK_ID] => 2
[NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[ACTIVE] => Y
[SORT] => 500
[CODE] => NAME_LONG
[DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
[PROPERTY_TYPE] => S
[ROW_COUNT] => 1
[COL_COUNT] => 30
[LIST_TYPE] => L
[MULTIPLE] => N
[XML_ID] => 45
[FILE_TYPE] =>
[MULTIPLE_CNT] => 5
[TMP_ID] =>
[LINK_IBLOCK_ID] => 0
[WITH_DESCRIPTION] => N
[SEARCHABLE] => N
[FILTRABLE] => N
[IS_REQUIRED] => N
[VERSION] => 1
[USER_TYPE] => HTML
[USER_TYPE_SETTINGS] => Array
(
[height] => 80
)
[HINT] =>
[PROPERTY_VALUE_ID] =>
[VALUE] =>
[DESCRIPTION] =>
[VALUE_ENUM] =>
[VALUE_XML_ID] =>
[VALUE_SORT] =>
[~VALUE] =>
[~DESCRIPTION] =>
[~NAME] => Название (для очень длинных заголовков)
[~DEFAULT_VALUE] => Array
(
[TYPE] => HTML
[TEXT] =>
)
)
)
Elena S. Lukojko1, Alexandr A. Migas1, Tatsiana V. Shman1, Igor N. Severin2, Olga A. Kalenik2, Natalya N. Konoplia2, Inna V. Proleskovskaya1, Olga V. Aleinikova3
1 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Republic of Belarus
2 N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus, Minsk, Republic of Belarus
3 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia
Contact: Dr. Elena S. Lukojko, e-mail: lenalukojko@gmail.com
Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has been actively introduced into clinical practice in Belarusian specialized healthcare institutions since 2020 as a part of research protocol NCT05333302. The main objective of given research protocol is safety and efficiency evaluation of locally manufactured CAR T-cell product in the treatment of CD19-positive relapsed/refractory (R/R) acute lymphoblastic leukemia (ALL) and lymphoma.
Materials and methods
Manufacture and clinical application of CAR T-cell product was performed at N. N. Alexandrov National Cancer Center of Belarus and in Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology. Populations of CD4 and CD8 T-cells were obtained by separate procedures from the apheresis product by immunomagnetic selection. Genetic modification of T-cells was performed by lentiviral transduction with bicistronic vector FMC63-41BB-3z-P2A-hEGFRt coding for second generation CAR and truncated variant of human epidermal growth factor receptor (hEGFRt). After ex vivo cell expansion for 12-14 days, the final CAR T-cell product underwent quality control including sterility check, immunophenotyping and functional activity testing. Pre-conditioning regimen of lymphodepleting chemotherapy included fludarabine and cyclophosphamide. Dose of infused CAR T-cells was in the range of 1-3×106 cells per kilogram of body weight depending on tumor burden. Treatment of cytokine release syndrome (CRS) and immune effector cell-associated neurotoxicity (ICANS) included tocilizumab and corticosteroids.
Results
CAR T-cell therapy was carried out for 13 patients. CAR T-cells expansion in vivo observed in 12 patients with median peak value 17 (range 1.7-224) cells/mcL of peripheral blood (PB). Median persistence of CAR T-cells in PB of recipients was 60 days (range 13-90). B-cell aplasia was observed in all patients with proven expansion of CAR T-cells. CRS events were confirmed in 77% of cases: grade 1, 7 patients; grade 2 CRS was seen in 1 case; grade 3, in 2 patients. ICANS developed in 46% of cases: grade 1, in 5 patients; grade 3, in 1 case. Complete response (CR) was detected in 6 out of 8 cases with B-ALL. One patient did not respond and died due to disease progression. One more patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Three out of six patients with CR subsequently developed relapse after 4, 5 and 18 months correspondingly. Median remission duration in given group was 9 months (range 4-18). CR was detected in 3 out of 5 patients with B-cell lymphomas, partial response (PR) in 1 case and 1 patient died due to complications (CRS + sepsis) not achieving clinical response. Patients with CR are in remission for 1, 6 and 10 months correspondingly. Patient with PR is preparing for autologous hematopoietic stem cell transplantation. Outcome: of 13 treated patients 9 are alive, 4 patients are dead, median duration of observation was 6 months (range 1-20).
Conclusion
The CAR-T cell technique is safe, reproducible and effective upon current follow-up of ALL patients.
Keywords
CAR Т-cell therapy, B-ALL, B-cell lymphoma.